论文摘要
目的：从人脐带中分离、培养间充质干细胞（mesenchymal stem cells, MSCs）并予以鉴定,研究其对再生障碍性贫血（aplastic anemia AA）患者骨髓、外周血单个核细胞（Mononucleae cell, MNC）的造血负调控因子表达的调节作用,以期为寻找更易获得且易于培养和纯化的MSC新来源及临床治疗AA、移植物抗宿主病（GVHD）及提高异基因造血干细胞移植（HSCT）成功率等提供细胞学方法及实验依据。方法：采用组织块培养法从人脐带（HUC）分离、培养MSC；通过形态和功能综合鉴定MSC；用密度梯度离心法分离AA患者骨髓、外周血单个核细胞（MNC）；将HUC-MSC与AA患者MNC按1：10的比例进行混合培养,用实时定量PCR（Real time PCR,RT-PCR）法分别测定共培养前后即0h和72h时造血负调控因子TGF-β1、IFN-γ、TNF-α、T-bet的mRNA表达水平的变化。所测数据采用SPSS17.0软件包进行分析。结果：培养至第2代的HUC-MSC的形态具有长梭形的典型改变及其生长特性,综合分析结果显示利用脐带可以获得性状稳定的MSC。脐带来源MSC与AA患者骨髓、外周血MNC共培养,共培养前后各个因子浓度比内参β-actin后相对定量的均数及标准差分别为：T-bet:共培养前0.255±0.046共培养72h后0.201±0.039,对照组：0.188±0.023（P>0.05）,差异无统计学意义；TGF-p1:共培养前0.152±0.041,共培养72h后0.321±0.034,对照组：0.122±0.024（P<0.05）,差异有统计学意义,共培养后浓度显著上升；TNF-α:共培养前0.634±0.035,共培养72h后0.198±0.051,对照组：0.246±0.043（P<0.05）,差异有统计学意义,共培养后浓度下降；IFN-γ:共培养前0.608±0.066,共培养后0.213±0.037,对照组：0.178±0.025（P<0.05）,差异有统计学意义,共培养后浓度下降。实验组与对照组及各实验组间有显著差异（P<0.05）。结论：研究证明可以从人脐带组织中成功分离出MSC,其具有与骨髓MSC相似的形态特征；将HUC—MSC与AA患者骨髓、外周血MNC共培养,发现HUC—MSC抑制AA患者T细胞表达IFN-γ、TNF-α的mRNA水平同时上调TGF-β1的mRNA水平,对T-bet的mRNA水平无显著影响；共培养前后对缺铁性贫血患者T细胞表达TGF-β1、IFN-γ、TNF-α、T-bet的mRNA水平无明显影响。脐带来源的MSC可能通过下调IFN-γ、TNF-α的水平同时上调TGF-β1水平,而调节AA免疫功能紊乱,故MSC的输注有可能成为治疗AA的一种新方法。
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标签：脐带间充质干细胞论文; 再生障碍性贫血论文; 细胞论文; 免疫调节论文; 造血负调控因子论文;