碘在体外培养成纤维细胞模型中的作用研究

论文摘要

【目的】本实验利用体外培养成纤维细胞模型,运用形态学观察、免疫细胞化学技术、流式细胞术及相关生化指标检测等多种方法研究不同浓度的碘离子及碘分子对体外培养成纤维细胞增殖活性与功能的影响,探讨碘对甲状腺外组织的作用,丰富微量元素碘的实验研究。【方法】1.细胞株:人皮肤成纤维（HSF）细胞株,购于协和医科大学基础医学细胞中心。常规细胞培养,待传代稳定后进行以下实验。2.试剂配制及实验分组:碘化钾,分析纯,以纯水配制成为1000mgI/L母液,避光保存,以DMEM培养液稀释待用。碘,分析纯,以纯水配制成饱和溶液,以化学滴定法测定其浓度,现配现用。本实验中,碘离子设1个空白对照组及50-1500μg/L中若干实验组;碘分子设1个空白对照组及50-400μg/L中若干实验组。3.细胞计数及形态学观察:种24孔板,待细胞贴壁后加入不同浓度的碘离子及碘分子,每板均设对照组,于作用4、12、24、48小时后进行细胞计数及观察细胞形态学改变。4.MTT:种96孔培养板,不同浓度碘离子及碘分子处理4、12、24、48小时后,每孔添加20μl（5mg/ml）MTT试剂,37℃孵育4小时,小心弃去培养液,每孔加入150μl二甲基亚砜（DMSO）,振荡10分钟。以酶标仪在490nm波长下测其光吸收值（吸光度A值）,可间接反映细胞数量。5.流式细胞术:不同浓度碘离子及碘分子处理细胞48小时,经离心—PBS冲洗—吹匀—固定—再离心—冲洗—吹打—染色（4℃,20-30分钟）后,以400目尼龙网过滤后上机检测。ModFit分析软件分析,用细胞分裂增殖指数表示相对增殖活力。6.免疫细胞化学:将洁净无菌的盖玻片放入6孔培养板中,制备单细胞悬液,种6孔板,以不同浓度的碘离子及碘分子处理48小时后取出盖玻片,固定细胞,检测细胞中Ki-67的表达。7.SOD、MDA检测:利用试剂盒对培养细胞的上清液中丙二醛（MDA）和超氧化物岐化酶（SOD）进行检测。【结果】1.细胞计数及MTT检测:碘离子浓度及碘分子浓度较低（如48小时:碘离子≤3000μg/L,碘分子≤400μg/L）时,细胞计数随浓度增加而增加,细胞活性也随浓度增加而升高;碘离子浓度及碘分子浓度较高（如48小时:碘离子≥3000μg/L,碘分子≥400μg/L）时,细胞计数随浓度增加而减少,细胞增殖活性也随浓度增加而降低,且可见细胞形态学改变。2.流式细胞术:碘离子浓度100-4000μg/L（碘分子浓度50-700μg/L）实验组细胞增殖指数明显高于对照组,同时细胞凋亡率明显低于对照组;碘离子浓度5000μg/L（碘分子浓度800μg/L）实验组细胞增殖指数与对照组比较没有明显差别,而细胞凋亡率明显高于对照组;碘离子浓度≥6000μg/L（碘分子浓度≥900μg/L）实验组细胞增殖指数明显低于对照组,同时细胞凋亡率明显高于对照组。3.免疫细胞化学:碘离子浓度100-3000μg/L（碘分子浓度50-500μg/L）实验组Ki-67的阳性率明显高于对照组;碘离子浓度≥500μg/L（碘分子浓度≥700μg/L）各实验组Ki-67的表达率明显低于对照组。4.SOD、MDA检测:碘离子浓度50-600μg/L（碘分子浓度50-300μg/L）实验组随碘离子浓度的增加SOD含量增加,碘离子浓度800-10000μg/L（碘分子浓度600-4000μg/L）实验组随碘离子浓度的增加SOD含量减少;碘离子浓度50-800μg/L（碘分子浓度50-500μg/L除200μg/L外）各实验组MDA含量与对照组比较无明显差别,碘离子浓度1000-1000μg/L（碘分子浓度700-4000μg/L）各实验组MDA含量与对照组比较明显高于对照组。【结论】1.碘对成纤维细胞增殖活性具有促进和抑制两方面的作用,其作用效果与作用时间作用浓度密切相关,即高碘对成纤维细胞增殖活性存在时间-剂量-效应关系。2.初步分析碘主要是通过对成纤维细胞氧化-抗氧化体系、细胞周期和细胞凋亡的调控来影响成纤维细胞增殖活性。3.碘分子对成纤维细胞增殖活性的作用明显强于碘离子,可能与碘分子本身的强氧化性有关。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 英文缩写词表
• 前言
• 材料与方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 附表
• 附图
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表及录用学术论文
• 攻读硕士期间参加科研
• 攻读硕士期间所获奖项
• 学位论文评阅及答辩情况表