本文主要研究内容
作者周俊涛（2019）在《反相微乳液定向表面印迹新方法及其在磷酸化多肽富集中的应用》一文中研究指出：研究目的分子印迹技术(MIT)是在聚合物基质中形成具有模板记忆的选择性位点。近年来,分子印迹聚合物(MIPs)因其所需的选择性,物理稳定性,热稳定性以及低成本等特性而引起了广泛的关注,并被广泛应用于固相萃取,化学传感器和人工抗体等许多领域。随着其作为研究热点的快速发展,它同时面临着许多挑战,涉及生物大分子印迹困难,结合位点异构,模板渗漏,与水介质的不相容性,结合能力低和传质缓慢,特别是现有分子印迹技术普遍存在的步骤繁琐等问题限制了其在多个方面的应用,效率低下等问题。针对于此种问题,我们构建了一种全新的高效分子印迹制备策略称为:反相微乳液定向表面印迹(Reversed Phase Microemulsion Oriented Surface Imprinting,RPM-OSI),这种方法将反相微乳液合成硅包磁纳米粒子与定向表面印迹综合起来,同时拥有这两种方法的优势,不仅如此,该种印迹策略可以扩展至其他的印迹体系中。显示了此种印记方法的通用性,此方法的出现为快速高效制备分子印迹材料提供了一条新思路。研究方案首先,我们选择适合的功能单体分别以RMP-OSI法与Bulk Imprinted合成以单磷酸腺苷(AMP)为印迹模板的MIPs,我们利用AMP印迹聚合物吸附AMP溶液,之后选择合适的洗脱液洗脱后测其吸光度,对合成的AMP印迹的SENMPs(Silica-Encapsulated Nanomagnetic Particles)进行一系列表征,并优化了此种新的合成方法。之后把它与Bulk imprinted的AMP印迹SENMPs做一系列对比,包括交叉反应性(选择七种与模板分子结构相似的化合物)等一系列参数,以体现该印迹方法的优越性。其次,由于磷酸化蛋白在生物体内具有重大的生物学意义,但其丰度太低,在检测之前富集是目前通行的做法,分子印迹技术是目前发展出来的一种新型富集方法,也是目前的研究热点,瞄准磷酸化蛋白检测这一热点,我们以RMP-OSI法,以磷酸根为模板,合成相应的印迹材料,并对这种方法进行相应的优化。对磷酸化肽进行特异性富集,并与基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)联用,建立离线联用平台用于蛋白质磷酸化的高效鉴定。最后,在真核生物中,蛋白质磷酸化的残基是丝氨酸(Ser),苏氨酸(Thr)和酪氨酸(Tyr),并且Ser,Thr和Tyr残基上的磷酸化比率是1800:200:11。然而含有p Tyr肽的蛋白质丰度非常低,且在质谱检测中磷酸肽的信号通常被高通量非磷酸化肽抑制。因此,有在MS分析之前要选择性富集p Tyr肽是必须的。我们针对于这个研究热点,为了进一步拓展RMP-OSI印迹方法的应用范围,我们以苯基膦酸(PPA)为模板,合成相应的印迹二氧化硅包裹的纳米磁性颗粒SENMPs。并以其特异性富集酪氨酸磷酸化肽段,用于MALDI-TOF MS检测。研究结果我们优化了以RMP-OSI印迹方法,印迹效果主要以印迹因子(IF)值体现,我们经过一系列实验发现,最好的印迹条件为三种硅烷化试剂加入比例为TEOS:APBA-GPTES:APTES为9.8:0.2:0.2,模板分子的加入量与APTES的摩尔比为1:1。之后我们把这种新方法与传统的Bulk imprint相比,前者得到的印迹材料交叉反应性远远低于传统的印迹方法,证明了其具有良好的抗干扰性与选择性,且其为“一锅法”优势在于其极大的简化了实验步骤。之后我们以同样的方法略作修改(改变其功能单体)合成磷酸根印记的SENMPs,同样将其合成过程优化,最佳硅烷化试剂加入比例为TEOS:UPTES=9.8:0.2,模板剂磷酸根的加入量与与修饰功能单体的硅源UPTES摩尔比为1:1。之后用PO4印迹SENMPs吸附吸附胰酶消化后的β-酪蛋白,发现其对磷酸化肽段的吸附性能优异。最后我们进一步拓展了此印迹方法应用范围,以苯基膦酸为印迹模板合成PPA印迹SENMPs,并以其富集酪氨酸磷酸化肽,由于在合成过程中仅替换了模板,其他如功能单体、硅烷化试剂都与PO4-印迹聚合物的合成过程相同,故直接采用磷酸根印迹优化后最佳结果。
Abstract
yan jiu mu de fen zi yin ji ji shu (MIT)shi zai ju ge wu ji zhi zhong xing cheng ju you mo ban ji yi de shua ze xing wei dian 。jin nian lai ,fen zi yin ji ju ge wu (MIPs)yin ji suo xu de shua ze xing ,wu li wen ding xing ,re wen ding xing yi ji di cheng ben deng te xing er yin qi le an fan de guan zhu ,bing bei an fan ying yong yu gu xiang cui qu ,hua xue chuan gan qi he ren gong kang ti deng hu duo ling yu 。sui zhao ji zuo wei yan jiu re dian de kuai su fa zhan ,ta tong shi mian lin zhao hu duo tiao zhan ,she ji sheng wu da fen zi yin ji kun nan ,jie ge wei dian yi gou ,mo ban shen lou ,yu shui jie zhi de bu xiang rong xing ,jie ge neng li di he chuan zhi huan man ,te bie shi xian you fen zi yin ji ji shu pu bian cun zai de bu zhou fan suo deng wen ti xian zhi le ji zai duo ge fang mian de ying yong ,xiao lv di xia deng wen ti 。zhen dui yu ci chong wen ti ,wo men gou jian le yi chong quan xin de gao xiao fen zi yin ji zhi bei ce lve chen wei :fan xiang wei ru ye ding xiang biao mian yin ji (Reversed Phase Microemulsion Oriented Surface Imprinting,RPM-OSI),zhe chong fang fa jiang fan xiang wei ru ye ge cheng gui bao ci na mi li zi yu ding xiang biao mian yin ji zeng ge qi lai ,tong shi yong you zhe liang chong fang fa de you shi ,bu jin ru ci ,gai chong yin ji ce lve ke yi kuo zhan zhi ji ta de yin ji ti ji zhong 。xian shi le ci chong yin ji fang fa de tong yong xing ,ci fang fa de chu xian wei kuai su gao xiao zhi bei fen zi yin ji cai liao di gong le yi tiao xin sai lu 。yan jiu fang an shou xian ,wo men shua ze kuo ge de gong neng chan ti fen bie yi RMP-OSIfa yu Bulk Imprintedge cheng yi chan lin suan xian gan (AMP)wei yin ji mo ban de MIPs,wo men li yong AMPyin ji ju ge wu xi fu AMProng ye ,zhi hou shua ze ge kuo de xi tuo ye xi tuo hou ce ji xi guang du ,dui ge cheng de AMPyin ji de SENMPs(Silica-Encapsulated Nanomagnetic Particles)jin hang yi ji lie biao zheng ,bing you hua le ci chong xin de ge cheng fang fa 。zhi hou ba ta yu Bulk imprintedde AMPyin ji SENMPszuo yi ji lie dui bi ,bao gua jiao cha fan ying xing (shua ze qi chong yu mo ban fen zi jie gou xiang shi de hua ge wu )deng yi ji lie can shu ,yi ti xian gai yin ji fang fa de you yue xing 。ji ci ,you yu lin suan hua dan bai zai sheng wu ti nei ju you chong da de sheng wu xue yi yi ,dan ji feng du tai di ,zai jian ce zhi qian fu ji shi mu qian tong hang de zuo fa ,fen zi yin ji ji shu shi mu qian fa zhan chu lai de yi chong xin xing fu ji fang fa ,ye shi mu qian de yan jiu re dian ,miao zhun lin suan hua dan bai jian ce zhe yi re dian ,wo men yi RMP-OSIfa ,yi lin suan gen wei mo ban ,ge cheng xiang ying de yin ji cai liao ,bing dui zhe chong fang fa jin hang xiang ying de you hua 。dui lin suan hua tai jin hang te yi xing fu ji ,bing yu ji zhi fu zhu ji guang jie xi fei hang shi jian zhi pu (MALDI-TOF MS)lian yong ,jian li li xian lian yong ping tai yong yu dan bai zhi lin suan hua de gao xiao jian ding 。zui hou ,zai zhen he sheng wu zhong ,dan bai zhi lin suan hua de can ji shi si an suan (Ser),su an suan (Thr)he lao an suan (Tyr),bing ju Ser,Thrhe Tyrcan ji shang de lin suan hua bi lv shi 1800:200:11。ran er han you p Tyrtai de dan bai zhi feng du fei chang di ,ju zai zhi pu jian ce zhong lin suan tai de xin hao tong chang bei gao tong liang fei lin suan hua tai yi zhi 。yin ci ,you zai MSfen xi zhi qian yao shua ze xing fu ji p Tyrtai shi bi xu de 。wo men zhen dui yu zhe ge yan jiu re dian ,wei le jin yi bu ta zhan RMP-OSIyin ji fang fa de ying yong fan wei ,wo men yi ben ji lin suan (PPA)wei mo ban ,ge cheng xiang ying de yin ji er yang hua gui bao guo de na mi ci xing ke li SENMPs。bing yi ji te yi xing fu ji lao an suan lin suan hua tai duan ,yong yu MALDI-TOF MSjian ce 。yan jiu jie guo wo men you hua le yi RMP-OSIyin ji fang fa ,yin ji xiao guo zhu yao yi yin ji yin zi (IF)zhi ti xian ,wo men jing guo yi ji lie shi yan fa xian ,zui hao de yin ji tiao jian wei san chong gui wan hua shi ji jia ru bi li wei TEOS:APBA-GPTES:APTESwei 9.8:0.2:0.2,mo ban fen zi de jia ru liang yu APTESde ma er bi wei 1:1。zhi hou wo men ba zhe chong xin fang fa yu chuan tong de Bulk imprintxiang bi ,qian zhe de dao de yin ji cai liao jiao cha fan ying xing yuan yuan di yu chuan tong de yin ji fang fa ,zheng ming le ji ju you liang hao de kang gan rao xing yu shua ze xing ,ju ji wei “yi guo fa ”you shi zai yu ji ji da de jian hua le shi yan bu zhou 。zhi hou wo men yi tong yang de fang fa lve zuo xiu gai (gai bian ji gong neng chan ti )ge cheng lin suan gen yin ji de SENMPs,tong yang jiang ji ge cheng guo cheng you hua ,zui jia gui wan hua shi ji jia ru bi li wei TEOS:UPTES=9.8:0.2,mo ban ji lin suan gen de jia ru liang yu yu xiu shi gong neng chan ti de gui yuan UPTESma er bi wei 1:1。zhi hou yong PO4yin ji SENMPsxi fu xi fu yi mei xiao hua hou de β-lao dan bai ,fa xian ji dui lin suan hua tai duan de xi fu xing neng you yi 。zui hou wo men jin yi bu ta zhan le ci yin ji fang fa ying yong fan wei ,yi ben ji lin suan wei yin ji mo ban ge cheng PPAyin ji SENMPs,bing yi ji fu ji lao an suan lin suan hua tai ,you yu zai ge cheng guo cheng zhong jin ti huan le mo ban ,ji ta ru gong neng chan ti 、gui wan hua shi ji dou yu PO4-yin ji ju ge wu de ge cheng guo cheng xiang tong ,gu zhi jie cai yong lin suan gen yin ji you hua hou zui jia jie guo 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自吉林大学的周俊涛，发表于刊物吉林大学2019-06-25论文，是一篇关于反相微乳液论文,定向表面印迹论文,分子印迹论文,硅包磁纳米材料论文,吉林大学2019-06-25论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自吉林大学2019-06-25论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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