针灸结合骨立冲剂对去卵巢大鼠骨钙代谢影响的研究

针灸结合骨立冲剂对去卵巢大鼠骨钙代谢影响的研究

论文摘要

目的:通过用针灸、骨立冲剂、针灸结合骨立冲剂及西药尼尔雌醇对去卵巢大鼠骨质疏松症治疗后观察、比较,探讨针灸结合骨立冲剂对去卵巢大鼠骨矿化及参与骨钙代谢的激素、局部因子骨钙素(BGP)mRNA与骨形态发生蛋白-2(BMP-2)mRNA表达的影响,为针灸药物结合治疗骨质疏松症提供实验依据,以期为临床治疗骨质疏松症提供更为有效的方法。方法:将6月龄雌性SD大鼠去除双侧卵巢建立骨质疏松症模型,随机分为模型组、针灸组、骨立冲剂组(简称骨立组)、针灸结合骨立冲剂组(简称针药结合组)及尼尔雌醇组(简称西药组)。针灸组选取腧穴“大杼(双)”、“肾俞(双)”、“脾俞(双)”、“命门”,针刺30分钟后用艾条温和灸上述腧穴各5分钟。每日1次,10次为1个疗程,疗程间隔休息1天,共治疗6个疗程;骨立组用骨立混悬液灌胃,每日1次,疗程同针灸组;针药结合组则在骨立灌胃后再施针灸组方法治疗;西药组以尼尔雌醇混悬液每周灌胃1次,其余5天灌胃生理盐水,每周休息1天后进入下一疗程,治疗时间同针灸组;假手术组和模型组均用生理盐水灌胃,每日1次,疗程同针灸组。治疗期满后,分别检测下列指标:(1)分别用火焰原子吸收法、钼锑抗比色法测定腰椎骨骨钙、骨磷含量;(2)用双能X线吸收法检测大鼠股骨BMD及用三点弯曲实验测试大鼠股骨骨强度;(3)运用扫描电镜观察大鼠股骨松质骨骨小梁结构形态;(4)采用竞争放射免疫法(RIA)测定血清雌二醇(E2)、甲状旁腺激素(PTH)、降钙素(CT)、骨钙素(BGP)含量;(5)利用RT-PCR技术检测大鼠股骨中BGP与BMP-2mRNA表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠骨钙、磷含量及骨密度极显著下降(P<0.01),骨强度明显减弱(P<0.01),骨微结构破坏,子宫萎缩明显(P<0.01),血清E2、BGP、CT含量极显著降低(P<0.01),PTH含量极显著升高(P<0.01),骨组织BGPmRNA、BMP-2mRNA表达明显减弱(P<0.01);通过针灸、骨立及针药结合治疗后,与模型组比较,骨钙、磷含量及骨密度、骨力学参数值不同程度升高(P<0.05或P<0.01),骨微结构不同程度改善,子宫萎缩得到不同程度控制,血清E2、BGP、CT含量极显著增加(P<0.01),PTH含量极显著下降(P<0.01),股骨BGPmRNA、BMP-2mRNA表达明显增强(P<0.01);针药结合组各指标值与针灸组、骨立组比较具有显著性差异(P<0.05或P<0.01),与西药组比较除子宫重量、血清E2、PTH、CT及股骨BGPmRNA、BMP-2mRNA具有显著差异(P<0.05或P<0.01)外,骨钙、磷、BMD、骨力学参数值均无差异(P>0.05),且骨小梁结构形态相似。结论:(1)绝经后骨质疏松症模型复制成功;(2)针灸、骨立和针药结合均能促进去卵巢大鼠骨质有效的矿化,改善骨微结构及增强股骨强度;(3)针灸、骨立和针药结合均能调节去卵巢大鼠参与骨钙代谢的激素E2、PTH、CT的表达,刺激骨形成,抑制骨吸收,促进骨钙代谢平衡;(4)针灸、骨立和针药结合均能促进去卵巢大鼠股骨组织BGPmRNA、BMP-2mRNA表达,使骨钙代谢趋于平衡;(5)针药结合对去卵巢大鼠骨钙代谢的调节作用明显优于单纯针灸、骨立的作用。

论文目录

  • 主要中英文缩略词对照表
  • 中文摘要
  • Abstract
  • 前言
  • 实验研究
  • 1 第一部分 针药结合对去卵巢大鼠骨质疏松症骨矿化的影响
  • 1.1 动物的选择与分组
  • 1.2 骨质疏松症模型的建立
  • 1.2.1 造模手术药品与器材
  • 1.2.2 造模方法
  • 1.3 治疗
  • 1.3.1 药物与主要器材
  • 1.3.2 治疗方案
  • 1.4 标本采集与处理
  • 1.4.1 取材用品
  • 1.4.2 检测仪器与试剂
  • 1.4.3 标本处理
  • 1.5 检测方法
  • 1.5.1 骨钙、磷检测方法
  • 1.5.2 骨密度检测方法
  • 1.5.3 骨小梁标本制作及观察方法
  • 1.5.4 骨生物力学检测方法
  • 1.6 统计方法
  • 1.7 实验结果与分析
  • 1.7.1 各组大鼠骨钙及骨磷含量比较
  • 1.7.2 各组大鼠骨密度比较
  • 1.7.3 各组大鼠股骨骨小梁形态结构
  • 1.7.4 各组大鼠股骨生物力学参数比较
  • 2 第二部分 针药结合对去卵巢大鼠骨质疏松症骨钙代谢相关生化指标的影响
  • 2.1 动物的选择与分组
  • 2.2 骨质疏松症模型的建立
  • 2.3 治疗
  • 2.4 标本采集与处理
  • 2.4.1 取材用品
  • 2.4.2 检测仪器与试剂
  • 2.4.3 标本处理
  • 2.5 检测方法
  • 2.5.1 雌二醇测定方法
  • 2.5.2 骨钙素测定方法
  • 2.5.3 甲状旁腺激素测定
  • 2.5.4 降钙素测定
  • 2.6 统计方法
  • 2.7 实验结果与分析
  • 2.7.1 各组大鼠子宫湿重及血清雌二醇含量比较
  • 2.7.2 各组大鼠血清骨钙素水平比较
  • 2.7.3 各组大鼠血清甲状旁腺激素及降钙素水平比较
  • 3 第三部分 针药结合对去卵巢大鼠骨质疏松症股骨BGPmRNA及BMP-2mRNA表达的影响
  • 3.1 动物的选择与分组
  • 3.2 骨质疏松症模型的建立
  • 3.3 治疗
  • 3.4 标本采集与处理
  • 3.4.1 取材用品
  • 3.4.2 检测仪器与试剂
  • 3.4.3 标本处理
  • 3.5 检测方法
  • 3.5.1 标本中总RNA的提取
  • 3.5.2 cDNA第一链的合成
  • 3.5.3 PCR扩增
  • 3.5.4 琼脂糖凝胶电泳显示PCR产物
  • 3.6 统计方法
  • 3.7 实验结果与分析
  • 3.7.1 各组大鼠骨组织BGPmRNA表达的观察
  • 3.7.2 各组大鼠骨组织BMP-2 mRNA表达的观察
  • 讨论
  • 1 关于绝经后骨质疏松症模型的探讨
  • 2 运用针药结合防治绝经后骨质疏松症的理论基础
  • 2.1 中医对绝经后骨质疏松症病因病机的研究
  • 2.2 针灸治疗绝经后骨质疏松症的依据
  • 2.3 骨立冲剂对绝经后骨质疏松症的作用
  • 3 针药结合对骨钙代谢的调节作用
  • 4 关于骨钙代谢机制的研究
  • 4.1 骨矿化与骨重建
  • 4.2 钙代谢过程
  • 4.3 骨钙代谢过程的调节
  • 5 使用尼尔雌醇作为西药阳性对照组的依据
  • 6 针药结合对去卵巢大鼠骨结构改善的作用
  • 2、PTH及CT含量的影响'>7 针药结合对去卵巢大鼠血清E2、PTH及CT含量的影响
  • 8 针药结合对去卵巢大鼠股骨BGPmRNA、BMP-2mRNA表达的影响
  • 8.1 针药结合促进BGPmRNA表达
  • 8.2 针药结合促进BMP-2mRNA表达
  • 问题与展望
  • 结论
  • 致谢
  • 参考文献
  • 附件一:文献综述
  • 附件二:扫描电镜照片
  • 附件三:在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果
  • 相关论文文献

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