胰腺癌膜蛋白质组学分析及Prohibitin作用机制的初步研究

胰腺癌膜蛋白质组学分析及Prohibitin作用机制的初步研究

论文摘要

研究背景胰腺癌是一种常见的消化道恶性肿瘤,其恶性程度高、预后差。近年来,胰腺癌的发病率在全球都有不断升高的趋势。由于胰腺癌发病早期并无明显的症状体征,早期的临床诊断和干预非常困难,加之手术切除率和5年生存率低,是目前严重威胁人类健康的恶性疾病之一。多年来,国内外众多学者已经从基因水平对胰腺癌进行了大量的研究。但是,基因只是遗传信息的载体,生命活动的本质是蛋白质作用的结果。只有对蛋白质性质、相互关系和生物功能全面认识,才能揭开生命现象的本质。细胞膜作为细胞与外界环境之间的屏障,在维持细胞的微环境、介导细胞与外界环境以及细胞与细胞之间的能量传递、物质运输、信号转导等生命活动中发挥了重要的作用。通过不同功能蛋白质在时间和空间上有序和协同作用,大量的生理功能才得以执行。目前,膜蛋白质组学已经成为蛋白质组学研究的重要组成部分,应用膜蛋白质组学技术有助于进行疾病发病机制的研究。因此,本实验计划通过蛋白质组学技术筛选胰腺癌细胞表达的膜相关蛋白,并对目标蛋白质进行生物学功能研究和临床病理验证,以期筛选有价值的功能蛋白质,进而探索胰腺癌发病机制和寻找胰腺癌治疗的潜在靶点。研究目的1.寻求和建立新的膜蛋白质组学研究系统,实现对膜蛋白质进行有效的提取、分离和鉴定。2.通过对胰腺癌PANC-1细胞的膜蛋白进行蛋白质组学研究,筛选有意义的胰腺癌膜蛋白肿瘤标记物。3.深入研究筛选出的膜蛋白的生物学功能,并在已经确诊的胰腺癌标本上验证目标蛋白的表达情况,进一步探索目标蛋白在胰腺癌发病机制中的作用,为胰腺癌早期临床诊断和干预提供思路。研究方法1.体外培养胰腺癌PANC-1细胞,应用双水相提取技术(PEG/Dextran)提取膜蛋白,分别以ASB-14和CHAPS作为蛋白裂解液中的两性离子去垢剂,通过双向电泳进行蛋白质分离。对分离的蛋白质进行MALDI-TOF/TOFMS质谱鉴定,并应用GOA、DAVID、STRING等生物信息学软件进行分析。2.通过siRNA干扰技术抑制抗增殖蛋白PHB1的表达,以临床化疗药物Doxorubicin诱导人胰腺癌PANC-1细胞和Bx-PC3细胞凋亡为研究模型,探讨PHB1在胰腺癌细胞凋亡中的分子功能。3.收集不同分化程度胰腺癌标本,利用免疫组织化学方法分析所筛选的膜蛋白PHB1在胰腺导管腺癌组织和癌旁组织中的表达情况。研究结果1.成功建立了双水相体系提取细胞膜蛋白的方法,并通过改良电泳裂解液组分增加了膜蛋白的溶解性,提高了膜蛋白分离鉴定效果。利用该方法成功分离了53种蛋白质分子,其中50种蛋白质分子有GOA注释,32个蛋白质分子为膜相关蛋白。2.生物信息学软件分析证实32种膜相关蛋白与代谢途径密切相关。其中PHB1基因在胰腺癌中的生物学功能尚不清楚,本实验选择对PHB1的生物学功能进行深入研究。3. siRNA干扰技术抑制PHB1的表达,化疗药物Doxorubicin诱导人胰腺癌PANC-1细胞和Bx-PC3细胞的凋亡后,Western blot结果显示凋亡相关蛋白CASP3和PARP1表达水平显著下调。PHB1是胰腺癌细胞凋亡过程中的重要分子,提示PHB1可作为胰腺癌肿瘤化疗治疗的潜在靶点。4.应用免疫组织化学方法对11例胰腺癌临床标本中PHB1的表达情况分析结果表明,PHB1在胰腺导管腺癌的癌旁组织中均有高表达,且高于不同分化的癌组织;不同分化的胰腺癌组织中均有PHB1的表达,并低于胰腺癌组织周围癌旁组织(即正常胰腺组织)的表达水平,且随胰腺导管癌分化水平降低,PHB1表达呈下降趋势。结论1.双水相技术结合改良的双向电泳技术联合质谱分析可以快速提取、分离、鉴定膜相关蛋白质,具有良好的膜蛋白提取率和鉴定率。2.细胞生物学功能分析结果显示,在化疗药物作用下,抑制PHB1表达后胰腺癌细胞凋亡相关蛋白表达明显降低少,因此PHB1是胰腺癌细胞凋亡过程中的重要分子,提示PHB1可作为胰腺癌化疗的潜在靶点。3.PHB1可以作为胰腺癌组织和癌旁组织的鉴别指标。在不同分化程度的胰腺癌组织中,PHB1可能是评价胰腺导管腺癌分化程度的指标。

论文目录

  • 中文摘要
  • ABSTRACT
  • 符号说明
  • 研究背景与前言
  • 第一部分 胰腺癌低分化细胞系PANC-1膜蛋白提取、分离与鉴定
  • 材料与方法
  • 实验结果
  • 讨论
  • 小结
  • 第二部分 沉默PHB1基因对胰腺癌细胞生物学功能影响的研究
  • 材料与方法
  • 实验结果
  • 讨论
  • 小结
  • 第三部分 胰腺癌患者组织中Prohibitin表达水平与临床病理特点的相关性研究
  • 材料与方法
  • 实验结果
  • 讨论
  • 小结
  • 文献综述
  • 附图表
  • 参考文献
  • 待发表SCI收录论文(一)
  • 待发表SCI收录论文(二)
  • 致谢
  • 攻读学位期间发表的学术论文目录
  • 学位论文评阅及答辩情况表
  • 相关论文文献

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    • [2].Prohibitin对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响[J]. 现代生物医学进展 2010(15)
    • [3].抗增殖蛋白Prohibitin与肿瘤[J]. 生理科学进展 2013(01)
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    • [5].prohibitin基因在胃癌中的表达及诱导胃癌细胞凋亡的机制研究[J]. 中国中西医结合消化杂志 2017(07)
    • [6].胰岛素对高糖环境下大鼠颌骨骨髓基质细胞成骨分化过程中Prohibitin表达的影响[J]. 上海口腔医学 2012(05)
    • [7].Prohibitin在单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化中的表达和作用[J]. 临床儿科杂志 2010(01)
    • [8].别嘌醇对2型糖尿病小鼠肾小管间质prohibitin表达与细胞凋亡的影响[J]. 中国老年学杂志 2014(10)
    • [9].过表达prohibitin促进NB4-R1急性早幼粒细胞白血病维甲酸耐药细胞凋亡[J]. 细胞与分子免疫学杂志 2014(09)
    • [10].Prohibitin基因的shRNA真核表达载体的构建及鉴定[J]. 第四军医大学学报 2009(20)
    • [11].肝癌患者血清和组织中prohibitin的表达及其临床意义[J]. 肝脏 2016(11)
    • [12].小鼠Prohibitin真核表达质粒的构建及在293T细胞中的表达[J]. 解剖科学进展 2017(03)
    • [13].Prohibitin在放射照射诱导鼻咽癌细胞凋亡中的表达及亚细胞定位的变化[J]. 癌变·畸变·突变 2016(03)
    • [14].家蝇Prohibitin基因的生物信息学分析[J]. 生物信息学 2016(04)
    • [15].不同家族史鼻咽癌患者癌组织Prohibitin的表达[J]. 中国中西医结合耳鼻咽喉科杂志 2016(02)
    • [16].全反式维甲酸对糖尿病大鼠肾小管-间质Prohibitin表达的影响[J]. 四川医学 2009(08)
    • [17].低氧环境下子宫内膜基质细胞增殖及Prohibitin表达[J]. 生殖医学杂志 2017(08)
    • [18].慢性丙型肝炎患者血清prohibitin表达水平的检测[J]. 胃肠病学和肝病学杂志 2014(09)
    • [19].Prohibitin启动子中胆固醇活性作用位点研究[J]. 中国病理生理杂志 2013(10)
    • [20].Prohibitin在胃癌组织中的表达及临床意义[J]. 吉林大学学报(医学版) 2008(04)
    • [21].Prohibitin表达及对乳腺癌细胞系MCF-7抑制生长的机制研究[J]. 现代检验医学杂志 2020(03)
    • [22].基于生物信息学的Prohibitin在乳腺癌中的表达及意义[J]. 临床检验杂志 2019(03)
    • [23].Prohibitin在姜黄素诱导人成骨肉瘤MG-63细胞凋亡过程中的调控机制[J]. 解剖学报 2015(01)
    • [24].Prohibitin蛋白与卵巢癌紫杉醇耐药相关性的初步研究[J]. 中南大学学报(医学版) 2012(12)
    • [25].DNA免疫法制备抗Prohibitin多克隆抗体的实验研究[J]. 免疫学杂志 2010(07)
    • [26].Prohibitin特异性MiR RNAi表达载体构建及其干扰效果测定[J]. 中国应用生理学杂志 2009(01)
    • [27].糖尿病大鼠肾小管-间质Prohibitin的表达[J]. 四川医学 2009(05)
    • [28].食管鳞状细胞癌组织中Prohibitin的表达及其临床意义[J]. 职业与健康 2019(01)
    • [29].沉默Prohibitin基因对人结直肠癌细胞株HCT116增殖和凋亡的影响[J]. 福建医药杂志 2016(01)
    • [30].Prohibitin在低胆固醇培养人前列腺癌细胞系PC-3中表达上调及其可能机制[J]. 中国病理生理杂志 2011(11)

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