论文摘要
肠球菌是人和动物肠道中的正常菌群,为条件致病菌。不仅可引起人和动物尿路感染、皮肤软组织和伤口感染,还可导致菌血症、心内膜炎、脑膜炎等严重感染。近年来由于抗生素的广泛应用,使肠球菌对多种抗菌药物产生耐药,并成为导致医院感染的重要致病菌。在美国,大约12%的院内感染由肠球菌引起,美国院内感染检测系统(NISS)已将其列为仅次于葡萄球菌的医院感染的第二大病原菌。因此,研究肠球菌耐药机制,对指导医学和兽医临床用药以及公共卫生均具有重要的意义。本研究利用细菌形态鉴定、革兰氏染色、16S rRNA扩增等方法在河南地区分离、鉴定了不同来源肠球菌71株。其中,人、猪和食品源肠球菌分别为30株、21株、20株。并通过药敏试验、耐药突变区及耐药基因检测与测序、质粒接合试验等技术来研究肠球菌对氟喹诺酮类和大环内酯类的耐药机制。结果显示,人、猪和食品源肠球菌对环丙沙星的耐药率分别为60.0%(18/30),52.3%(11/21)和15.0%(3/20)。氟喹诺酮类药物耐药决定区gyrA和parC基因的PCR产物测序显示,GyrA氨基酸的83位、87位和ParC氨基酸的80位分别发生单个突变或多个突变,即Ser83→Ile、Arg或Tyr, Glu87→Gly和Ser80→lle。人、猪和食品源肠球菌对红霉素的耐药率分别为60.0%(18/30),100%(21/21)和30.0%(6/20)。肠球菌大环内酯类耐药基因(ermA、emrB、ermC、mefA/E和msrC)的PCR检测显示,所有红霉素耐药肠球菌均检测到ermB基因,其中有1株同时检测到mefA/E基因。质粒接合试验显示,ermB基因可以发生接合,接合型转座子Tn1545以及接合型质粒在ermB基因的水平扩散中发挥重要作用。另外,试验也检测到了tndX整合酶的存在,但与目前已报道的Tn5397和Tn1116无关,提示有可能存在新型接合型转座子,有待于进一步研究证实。综上所述,本研究在河南地区医院、猪场和零售市场分离、鉴定了71株肠球菌,这些菌株对环丙沙星和红霉素的耐药率分别为45.1%和63.4%。氟喹诺酮类药物耐药决定区GyrA氨基酸的83位、87位和ParC氨基酸的80位发生的一个突变或多个突变,即Ser83→Ile、 Arg、Tyr,Glu87→Gly和Ser80→Ile是不同来源源肠球菌对环丙沙星耐药的主要原因。ermB基因是不同来源肠球菌对红霉素耐药的主要原因,其可以发生接合,也可由接合型转座子Tn1545介导。进一步深入阐明已有或新型接合型转座子在肠球菌大环内酯类药物耐药基因ermB水平扩散中的作用具有重要的临床意义。