不同生态条件和耕作制度烟田土壤微生物多样性的研究

论文摘要

采用Bead beating法提取了不同生态条件和耕作制度的烟田土壤微生物总DNA,以细菌16S rDNA V3区通用引物对进行降落PCR扩增,产物进行变性凝胶梯度电泳(DGGE),经过对不同生态条件和耕作制度烟田土壤DGGE指纹图谱的分析,主要结论如下:Bead beating法提取土壤微生物总DNA,既保证了DNA不受机械损伤,又兼顾了DNA的质量,提取的微生物DNA可直接用于后续酶反应。单一施用有机肥对土壤微生物多样性影响最大。施用75%无机肥配25%有机肥利于较快提高土壤中微生物多样性。单一施用无机肥降低根际土中微生物多样性,能提高非根际土中微生物多样性。在烟草生长过程中,连作土壤中微生物种群变化幅度最大,微生物多样性最高,其次为间隔2年土壤样品;间隔4年土壤中微生物多样性随烟草生长降低。海拔746m土壤中,非根际土微生物多样性从旺长期到采收期呈降低趋势,根际土相反。海拔933m和海拔1095m土壤中微生物多样性从旺长期到采收期升高,其中海拔1095m的土壤微生物多样性大于海拔933m土壤。随海拔升高,非根际土与对应根际土的相似性降低。海拔越低,旺长期土壤与采收期该土壤的相似性越高。黄棕壤非根际土移栽期时微生物多样性最低,根际土移栽期微生物多样性最高,微生物多样性从烟草旺长期到采收期变化较小。紫色土微生物多样性低于黄棕壤。从旺长期到采收期紫色土微生物多样性降低明显。黄棕壤旺长期与采收期的相似性大于紫色土旺长期与采收期的相似性。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 绪论
• 1.1 微生物多样性
• 1.1.1 形态多样性（Morphological diversity）
• 1.1.2 结构多样性（Structural diversity）
• 1.1.3 代谢多样性（Metabolic diversity）
• 1.1.4 生态多样性（Ecological diversity）
• 1.1.5 行为方式多样性（Behavioral diversity）
• 1.1.6 遗传多样性（Genetic diversity）
• 1.2 土壤微生物多样性
• 1.2.1 土壤微生物多样性
• 1.2.2 土壤微生物多样性在农业生态系统中的作用
• 1.2.3 土壤微生物多样性的影响因素
• 1.2.4 土壤微生物多样性的研究方法
• 第2章 几种土壤微生物总DNA 提取方法的比较
• 2.0 前言
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 实验仪器
• 2.1.2 主要试剂
• 2.2 方法
• 2.2.1 Bourrain（冻融法）土壤微生物总DNA 的提取方法
• 2.2.2 石英砂法土壤微生物总DNA 的提取方法
• 2.2.3 Bead beating 土壤微生物总DNA 的提取方法
• 2.2.4 DNA 量和分子量大小的测定
• 2.2.5 DNA 纯度的测定
• 2.2.6 PCR 扩增反应
• 2.3 结果与分析
• 2.3.1 三种方法DNA 提取量和分子量大小
• 2.3.2 三种方法提取DNA 的纯度
• 2.3.3 PCR 扩增
• 2.5 小结
• 第3章 不同施肥处理烟田土壤微生物多样性分析
• 3.1 前言
• 3.2 材料与方法
• 3.2.1 实验仪器
• 3.2.2 主要试剂
• 3.2.3 样品采集与处理
• 3.2.4 不同施肥方式烟田土壤微生物总DNA 的提取及浓度测定
• 3.2.5 不同施肥方式烟田土壤中微生物16S rDNA 的PCR 扩增
• 3.2.6 不同施肥方式烟田土壤样品PCR-DGGE
• 3.2.7 不同施肥方式烟田土壤微生物多样性的测定及分析方法
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 不同施肥方式烟田土壤微生物总DNA 提取及浓度测定
• 3.3.2 不同施肥方式非根际土中微生物16S rDNA 的PCR 扩增
• 3.3.3 不同施肥方式烟田非根际土中微生物多样性分析
• 3.3.4 不同施肥方式烟田根际土中微生物多样性分析
• 3.4 小结
• 第4章 不同间隔年限烟田土壤微生物多样性分析
• 4.1 前言
• 4.2 材料与方法
• 4.2.1 实验仪器
• 4.2.2 主要试剂
• 4.2.3 样品采集与处理
• 4.2.4 不同间隔年限土壤微生物总DNA 的提取及浓度测定
• 4.2.5 不同间隔年限烟田土壤中微生物16S rDNA 的PCR 扩增
• 4.2.6 不同间隔年限烟田土壤样品PCR-DGGE
• 4.2.7 不同间隔年限烟田土壤微生物多样性的测定及分析方法
• 4.3 结果与分析
• 4.3.1 不同间隔年限烟田土壤微生物总DNA 提取及浓度测定
• 4.3.2 不同间隔年限烟田土壤微生物16S rDNA 的PCR 扩增
• 4.3.3 不同间隔年限烟田土壤中微生物多样性分析
• 4.4 小结
• 第5章 不同海拔高度烟田土壤微生物多样性分析
• 5.1 前言
• 5.2 材料与方法
• 5.2.1 实验仪器
• 5.2.2 主要试剂
• 5.2.3 样品采集与处理
• 5.2.4 不同海拔高度烟田土壤微生物总DNA 的提取及浓度测定
• 5.2.5 不同海拔高度烟田土壤中微生物16S rDNA 的PCR 扩增
• 5.2.6 不同海拔高度烟田土壤样品PCR-DGGE
• 5.2.7 不同海拔高度烟田土壤微生物多样性的测定及分析方法
• 5.3 结果与分析
• 5.3.1 不同海拔高度烟田土壤微生物总DNA 提取及浓度测定
• 5.3.2 不同海拔高度烟田土壤中微生物16S rDNA 的PCR 扩增
• 5.3.3 不同海拔高度烟田烟田土壤中微生物多样性分析
• 5.4 小结
• 第6章 不同土壤类型烟田土壤微生物多样性分析
• 6.1 前言
• 6.2 材料与方法
• 6.2.1 实验仪器
• 6.2.2 主要试剂
• 6.2.3 样品采集与处理
• 6.2.4 土壤微生物总DNA 的提取及浓度测定
• 6.2.5 不同土壤类型烟田土壤中微生物16S rDNA 的PCR 扩增
• 6.2.6 不同土壤类型烟田土壤样品PCR-DGGE
• 6.2.7 不同土壤类型烟田土壤微生物多样性的测定及分析方法
• 6.3 结果与分析
• 6.3.1 不同土壤类型烟田土壤微生物总DNA 提取及浓度测定
• 6.3.2 不同土壤类型烟田土壤中微生物16S rDNA 的PCR 扩增
• 6.3.3 不同土壤类型烟田中微生物多样性分析
• 6.4 小结
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录 攻读学位期间发表的论文