糖尿病人脂肪干细胞的分离、培养和向内皮细胞的分化研究

论文摘要

背景：糖尿病作为长期威胁人类健康的全球性难题,其慢性并发症常导致多个系统器官功能障碍和衰竭,而目前治疗方法均不甚理想,相当患者最终致死致畸。目前认为,糖尿病慢性并发症中血管病变更是主要和始发的致病因素,而血管病变的关键靶组织为内皮细胞。内皮细胞在调节血管张力、管壁渗透性、参与血管形成和重塑、参与细胞内激素的下游信号传递功能等方面发挥了重要作用,在病变情况下,内皮细胞存在大量功能异常,通过移植内皮细胞或者具有诱导分化为内皮细胞能力的干细胞便成为一种极具前景的治疗方法。而脂肪干细胞作为近年发现的血管组织工程优秀的种子细胞,除本身卓越的分化能力外,兼具来源广,易获取,创伤小,增殖速度快等诸多优点。目前多项研究已经证实了正常人脂肪干细胞具有向内皮细胞诱导分化的能力,但关于糖尿病患者自身脂肪干细胞的研究较少,该细胞是否具有和正常人ADSC类似的干细胞特性,是实现糖尿病患者ADSC自体移植治疗的问题关键。目的：1.建立糖尿病患者脂肪干细胞的分离培养流程,比较与正常人ADSC的差异。2.研究糖尿病患者脂肪干细胞诱导分化为内皮细胞的能力,为实现糖尿病患者ADSC自体移植治疗提供理论依据。方法：实验组：来自糖尿病人的脂肪干细胞对照组：来自正常人的脂肪干细胞分别取正常人和糖尿病人脂肪组织,按正常人脂肪干细胞的分离培养流程进行两组细胞的分离,培养；取P3代脂肪干细胞,分别用流式细胞仪检测两组细胞表面标记CD29, CD44, CD105的表达；取P3代脂肪干细胞,使用内皮细胞诱导培养基于24孔板内进行两组细胞向内皮细胞的诱导分化,对比观察诱导过程中两组细胞的形态变化,并取诱导6d、9d、12d的两组细胞进行CD31的免疫细胞化学染色,观察诱导结果。结果：糖尿病人脂肪组织采取和正常脂肪干细胞类似的分离培养流程可以获得呈典型形态的脂肪干细胞；流式细胞仪检测实验组和对照组P3代脂肪干细胞CD29、 CD44、CD105均呈阳性表达；两组细胞向内皮细胞诱导后,6d细胞形态均逐渐发生改变,9d出现CD31免疫细胞化学染色阳性的细胞,12d可观察到典型内皮细胞形态,并且CD31染色阳性细胞增加。结论：1.建立了糖尿病人ADSC分离、培养的初步方法：通过和正常人ADSC类似的分离培养流程,可以实现从糖尿病人脂肪组织中提取ADSC。2.证明了糖尿病人ADSC具有正常干细胞的自我复制更新能力。3.证明了糖尿病人ADSC的分化能力：在体外存在诱导剂情况下能够分化为内皮细胞。

论文目录

• 英文缩略词表
• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 第一部分：人脂肪干细胞的培养、分离和鉴定
• 1. 实验材料
• 2. 实验方法
• 3. 实验结果
• 第二部分：糖尿病人脂肪干细胞的分离,培养和鉴定
• 1. 实验材料
• 2. 实验方法
• 3. 实验结果
• 第三部分：糖尿病人和正常人ADSC向内皮细胞的分化研究
• 1. 实验材料
• 2. 实验方法
• 3. 实验结果
• 第四部分 实验讨论
• 1. 关于实验选题
• 2. 关于正常人AD5C的分离,培养
• 3. 关于ADSC的鉴定
• 4. 关于糖尿病患者ADSC的培养
• 5. 关于糖尿病人ADSC鉴定
• 6. 关于糖尿病患者ADSC向内皮细胞的诱导分化
• 7. 实验不足和展望
• 第五部分 结论
• 文献综述
• 参考文献
• 附录：脂肪干细胞的应用简表
• 致谢