红树植物共附生真菌抗菌活性成分研究

论文摘要

本研究选取红树植物土壤真菌095407和内生真菌橘青霉093503为研究对象,以金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）和白色念珠菌为抗菌活性筛选模型,采用活性追踪的方法,对菌株的代谢产物进行研究。用色谱技术对活性成分进行分离纯化,通过其理化性质和波谱学方法共鉴定出20个单体化合物,其中（3R*,4S*）-6,8-dihydroxy-3,4,7-trimethylisocou-marin （1）为新化合物,3,4,5-trimethyl-1,2- benzenediol （2）为新的天然产物,其他为已知化合物:β-谷甾醇（3）、油酸（4）,decarboxydihydrocitrinone （5）、phenol A （6）、刺芒柄花素（7）、尿苷（8）、环（丙氨酸-异亮氨酸） （9）、环（甘氨酸-酪氨酸） （10）、（3β, 4β, 22β）-12-烯-3,22,23-三羟基-齐墩果烷（11）、油酸单甘油酯（12）、1-呋喃基-1,2-乙二醇（13）、甘草素（14）、环（脯氨酸-苏氨酸） （15）、环（脯氨酸-酪氨酸） （16）、正丁基-O-β-D-吡喃果糖苷（17）、甘露醇（18）、2,3-丁二醇（19）和4′,7,8-trihydroxyisoflavone （20）。采用滤纸片琼脂扩散法测定组分和化合物对金黄色葡萄球菌、MRSA和白色念珠菌抑制活性,结果表明2、4、5、14、15和16等6个单体化合物和093503菌株的两个组分a-2和a-3对金黄色葡萄球菌和MRSA显示不同程度的抑制活性;093503菌株的两个组分a-1和a-3对白色念珠菌有抑制活性。活性组分经GC-MS分析,确定了其主要成分。a-1主要成分为棕榈酸甲酯、油酸甲酯和硬脂酸甲酯;a-2主要成分为硬脂酸甲酯和亚油酸甲酯;a-3主要成分为油酸、苯甲酸和苯乙酸。本文首次报道了化合物2, 5, 15和16等4个化合物的抗菌活性、a-1组分对白色念珠菌抑制活性和a-2组分对金葡和MRSA抑制活性。研究结果表明海洋红树植物真菌代谢产物结构新颖,类型丰富多样,有良好的抗菌活性,证明海洋真菌资源有着很大的研究开发潜力。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 缩略语
• 第1章 前言
• 1.1 海洋微生物的研究意义
• 1.2 海洋真菌的研究进展
• 1.2.1 海洋真菌的分布
• 1.2.2 海洋真菌代谢产物的多样性
• 1.3 病原菌流行现状
• 1.3.1 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌
• 1.3.2 白色念珠菌
• 1.4 本课题的研究意义
• 第2章 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 实验菌株
• 2.1.2 实验仪器
• 2.1.3 常用耗材
• 2.1.4 试剂
• 2.1.5 培养基
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 抗菌活性测定
• 2.2.2 菌株的选取
• 2.2.3 萃取预实验
• 2.2.4 发酵
• 2.2.5 有效组分的确定
• 2.2.6 硅胶柱层析
• 2.2.7 葡聚糖凝胶层析
• 2.2.8 高压液相色谱
• 2.2.9 结晶实验
• 2.2.10 肽类化合物的薄层识别
• 2.2.11 结构鉴定
• 第3章 结果与分析
• 3.1 预实验结果
• 3.1.1 选取菌株
• 3.1.2 菌株活性部位的确定
• 3.2 分离纯化
• 3.2.1 发酵液的前处理
• 3.2.2 菌株095407 代谢产物的分离纯化
• 3.2.3 菌株093503 代谢产物的分离纯化
• 3.3 结构鉴定
• 3.4 活性测试结果
• 3.5 活性组分成分分析
• 第4章 讨论
• 4.1 活性跟踪检测
• 4.2 代谢产物多样性
• 4.3 代谢产物与生物活性
• 4.4 海洋真菌研究的价值
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 攻读学位期间发表的学位论文
• 致谢