大承气汤方药物质基础及其配伍规律研究

论文摘要

大承气汤出自张仲景《伤寒论》,为泻下的代表方剂,本研究对其提取工艺、配伍前后化学成分和药效的变化规律、物质基础以及剂量配伍进行研究。（1）本实验首先建立了大黄蒽醌类成分（芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚）HPLC含量测定方法,枳实黄酮类成分（柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷）HPLC含量测定方法以及厚朴类成分（和厚朴酚、厚朴酚）HPLC含量测定方法。所建立的方法简便、快速、数据真实、可靠、准确。在单因素考察试验的基础上,采用星点设计-响应面法,分别以大黄蒽醌类、枳实黄酮类、厚朴类成分为考察指标,对大承气汤的提取工艺进行优化。由实验数据所绘制的曲面图可以看出,乙醇体积分数、提取时间对考察指标的影响较大,而溶媒比对考察指标的影响相对较小。最终确定最佳工艺为60%乙醇、提取时间为90min,溶媒比为20倍量。（2）考察了大承气汤中单味药以及复方配伍后的化学成分变化,对大承气汤复方配伍的化学物质基础进行研究。针对中药化学成分的复杂性,对色谱流动相、比例,检测波长,色谱柱温度,进样量等色谱条件进行优化,建立了全方HPLC统一分析方法,并对分析方法做了仪器精密度、样品稳定性和方法重复性等考察。结果表明所建立的方法稳定、可靠、重复性好。统一的HPLC分析方法的建立是进行复方配伍前后成分变化研究的基础。利用在该统一HPLC分析方法下得到的色谱图的保留时间对大承气汤中49个峰的来源进行归属,并对配伍前后化学成分含量的变化进行了研究。结果说明:大承气汤配伍中有12个峰来自枳实,12个峰来自厚朴,17个峰来自大黄,1个峰是大黄、厚朴和枳实的共流出峰,5个峰是大黄、枳实的共流出峰,2个峰是大黄、厚朴的共流出峰,在目前的研究条件下考察,没有新峰产生。对全方配伍前后化学成分含量的变化,有24个峰的峰面积增加,8个峰的峰面积降低,这些含量发生变化的峰所对应的成分,可能就是大承气汤配伍作用的化学物质基础。全方配伍后柚皮苷、新橙皮苷、和厚朴酚、厚朴酚的峰面积没有变化,大黄素甲醚的峰面积降低,而橙皮苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚的峰面积都是增加的,说明了大承气汤四味药材合煎后,能显著增加有效成分的溶出率,达到增强药效的结果。（3）将大承气汤中的四味药,以君药大黄为核心,依次配伍其它两味中药,进行拆方药对设计,以及不同煎煮方法的实验,通过测定不同药对配伍,不同煎煮方法后芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、厚朴酚、和厚朴酚的含量变化,对药对配伍方法有效成分变化规律以及全方配伍中不同煎煮方法有效成分变化规律进行研究。结果表明,不同药对配伍,以及不同煎煮方法对厚朴类成分和枳实黄酮类成分溶出的影响不大。但芒硝、大黄后下,在煎煮过程中可以提高蒽醌类成分的溶出率;厚朴、芒硝、枳实与大黄进行配伍,也能显著增加大黄中蒽醌类成分的溶出率。这说明了大承气汤传统煎法要求“先煎枳、朴,后下大黄,纳芒硝,溶化服”,其科学性就在于有效地提高主要有效成分的溶存量而为其药效作用提供物质基础,从而可以达到增强药效的目的。（4）实验利用黑色墨汁作为指示剂,观察墨汁在肠道的推进距离,对大承气汤泻下作用的配伍机制研究,同时,选用家兔离体肠,考察各给药组对肠平滑肌收缩的影响情况。本实验中,相对空白组,大承气汤各不同配伍组对小鼠小肠的推进率均较高,对家兔肠管张力、兔肠管收缩频率均有显著性差异或非常显著性差异（P＜0.01,P＜0.05）。大黄+芒硝组的推进率、对家兔肠管张力、兔肠管收缩频率较高,说明了芒硝的芒硝与大黄配伍,有较强的泻下作用。经典煎煮方法的大承气汤,泻下作用最强。（5）研究了复方大承气汤的化学成分相应色谱峰与药效物质基础,对49个色谱峰与药效进行相关性分析,其中11个色谱峰与药理效应Y1（小鼠小肠碳末推进率）有显著性（P＜0.05）或非常显著性（P＜0.01）;3个色谱峰与药理效应Y3显著性差异（P＜0.05）,2号峰为负相关。从实验的相关分析结果来看,可以说明厚朴酚、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚等化学成分为大承气汤发挥药效作用的物质基础,也说明了这些化学成分作为质量控制和工艺优化指标的合理性和科学性。（6）应用Doehlert设计-渴求函数.响应曲面优化法,研究枳实、厚朴和芒硝的剂量配伍变化对大黄蒽醌类成分在整方中溶出的影响。通过对3个自变量（枳实,厚朴,芒硝）进行配伍试验及其结果预测,优化二项式方程的变量值,得到具有良好拟合性的模型,自变量的变化与指标性成分之间的相关分析说明3个自变量（枳实,厚朴,芒硝）对大黄蒽醌成分的提取百分含量有较高的显著性影响,特别是厚朴。以得到的方程为分析模型,可以得出当剂量配比为大黄:枳实:厚朴:芒硝（1∶4∶2.31∶2）时,D有预测的最大值0.85。本研究在中医药学理论和实践的指导下将中药学、分析化学、药理学、统计学和计算机技术相结合,优化了大承气汤的提取工艺,探讨了其复方的配伍机制、药效物质基础,为大承气汤方药配伍及中药复方配伍的方法学研究提供了理论依据。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 引言
• 第一部分 文献综述
• 1 中药复方配伍规律研究
• 2 本课题的研究思路
• 3 大承气汤方源考证
• 4 各单味药的来源和成分研究
• 5 大承气汤的化学成分、质量控制研究
• 6 大承气汤泻下作用的研究
• 7 数学模型在药学中的研究与应用
• 参考文献
• 第二部分 实验研究
• 第一章 大承气汤提取工艺的研究
• 1 仪器、材料与试剂
• 2 干膏制备
• 3 大黄蒽醌类成分HPLC含量测定方法的建立
• 4 枳实黄酮类成分HPLC含量测定方法的建立
• 5 厚朴类成分HPLC含量测定方法的建立
• 6 星点设计-响应面优化法优选大承气汤提取工艺
• 6.1 星点设计-响应面优化法概述
• 6.2 单因素考察法确定星点设计考察因素
• 6.3 选择提取因素及相关水平
• 6.4 星点设计矩阵
• 6.5 以大黄蒽醌类成分为指标的拟合模型
• 6.6 以枳实黄酮类成分为指标的拟合模型
• 6.7 以厚朴类成分为指标的拟合模型
• 6.8 验证实验
• 7 讨论
• 参考文献
• 第二章 大承气汤复方配伍的化学物质基础研究
• 1 仪器、材料与试剂
• 2 样品提取液的制备
• 3 全方HPLC统一分析方法的建立
• 4 大黄、厚朴和枳实在全方中各峰归属
• 5 大承气汤配伍前后化学成分含量的变化分析
• 6 小结
• 参考文献
• 第三章 大承气汤中不同配伍方法有效成分变化规律的研究
• 1 仪器、材料与试剂
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 5 小结
• 参考文献
• 第四章 大承气汤不同配伍方法的药理实验研究
• 1 对小鼠小肠推进的影响（墨汁法）
• 2 对家兔肠的影响（离体平滑肌实验）
• 3 小结
• 参考文献
• 第五章 大承气汤的化学成分与药效相关性研究
• 1 仪器、材料与试剂
• 2 样品提取液的制备
• 3 混合对照品溶液的制备
• 4 供试品溶液的制备
• 5 HPLC分析
• 6 大承气汤化学成分与药效相关性分析
• 7 讨论
• 第六章 基于Doehlert设计法的大承气汤配伍研究
• 1 仪器与材料
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 参考文献
• 结语
• 创新性
• 在学期间发表论文情况
• 致谢