论文摘要
原发性肝癌是消化系统常见的恶性肿瘤。目前肝癌首选的治疗方案仍然是手术切除,但手术切除率低,术后复发率高,因此化疗常常是可供选择的主要治疗方法和手段。肿瘤化疗药物大多为细胞毒性药物,对恶性肿瘤细胞和正常组织细胞缺乏特异性和靶向性,具有较大的毒副作用。因此寻求一种简便、安全、有效、可重复使用的局部化疗技术是研究的热点和难点。声动力疗法是利用超声具有深部穿透并能聚焦于肿瘤局部的能力,化学激活相对无毒的声敏剂分子,产生单线态氧和（或）自由基,有针对性地杀伤肿瘤细胞,被认为是一种很有推广前景的物理疗法,但存在声敏剂在组织内分布不理想的缺点。最近研究发现,超声靶向破坏载药微泡定位释放技术是一种新型无创的靶向治疗技术,可以使药物在靶组织内局部释放并能促使药物进入靶细胞内,为克服声动力疗法的不足提供了新的思路。近几年,声动力治疗学和超声靶向破坏载药微泡定位释放技术的研究都取得巨大的进步,且产生生物学效应的基础均为空化效应,因此我们试想利用微泡破裂所致的空化效应增强血卟啉的声动力效果。因此本研究旨在制备出一种新型的载血卟啉的脂质超声微泡造影剂,检测其粒径大小、浓度、稳定性、包封率、显像效果以及进行联合应用超声和载血卟啉微泡治疗兔肝VX2肿瘤疗效的观察与机理的探讨,为超声介导载声敏剂微泡在特定组织内的药物治疗提供实验基础。本?课题研究主要包括以下两个部分的内容:第一部分载血卟啉脂质微泡的制备及一般特性研究目的制备一种载声敏剂的脂质超声微泡并测定其粒径大小、浓度、包封率、观察其体内超声显像效果。方法采用机械振荡的方法制备载血卟啉的脂质超声微泡,用荧光分光光度仪测定其包封率,用倒置显微镜及马尔文激光粒径测量仪测量粒径大小、分布和Zeta电位;观察60Coγ射线灭菌前后造影剂外观、形态、浓度和平均粒径的改变,并观察其在兔肝内的显像效果。结果载药脂质微泡的浓度为（3.24±0.49）×109/ml,粒径范围为1.5～5.3μm,平均粒径为2.8±0.4μm;载血卟啉脂质微泡的包封率为30.25±4.45 %;Zeta电位为-（15.4±2.4）mV。经60Coγ射线灭菌后观察微泡形态、粒径及包封率无明显变化,其平均粒径大小及包封率分别为2.2±0.3μm,27.39±2.91 %。静脉注射此载药微气泡后,小鼠肝脏可见良好、持续的增强显像效果。结论采用机械振荡法制备的载血卟啉脂质微泡,包封率较高,粒径分布均一,体内显像效果好,有望实现实时监控下的体内定点靶向给药。第二部分超声联合载血卟啉微泡治疗兔肝VX2肿瘤的试验研究第一节兔肝VX2肿瘤模型的建立及超声监测?目的探讨兔肝VX2肿瘤模型的建立方法及超声检查对肿瘤的监测。方法采用瘤块肝内种植法建立兔肝VX2肿瘤模型,病理解剖验证VX2瘤株在兔肝脏的成瘤情况;用2DUS、CDFI及CEUS观察肿瘤的大小、回声、血流灌注及生长特点,从而评估超声在兔肝VX2肿瘤模型监测中的应用价值。结果采用瘤块移植法成功建立起稳定的兔肝VX2肿瘤模型,成瘤率为93.33% ;超声能准确测量肿瘤的大小,能实时、准确地监测肝内肿瘤的回声变化及肿瘤血管的分布情况;肿瘤的声学造影特点为典型的“快进快出”。结论瘤块移植法是一种操作简单、成瘤率高的建立兔肝VX2肿瘤模型的方法;超声检查能准确、方便、无创地监测兔肝VX2肿瘤的生长;超声检查为利用该模型评价治疗肝癌的新技术的疗效提供了有效的监测方法。第二节超声定位辐照载血卟啉微泡治疗兔肝VX2肿瘤的实验研究目的研究超声定位辐照载血卟啉微泡介导药物靶向释放技术对兔VX2肝移植瘤的治疗效果。方法35只新西兰大白兔,于肝左叶内植入VX2肿瘤组织块,建立肝移植瘤模型。实验动物随机分成7组,每组5只,包括①超声定位辐照载血卟啉微泡组（US+LMLH）、②超声定位辐照血卟啉组（US+HP）、③超声定位辐照空白脂质微泡组（US+MB）、④单纯载血卟啉微泡组（LMLH）、⑤单纯血卟啉组（HP）、⑥单纯超声辐照组（US）和⑦生理盐水对照组（C）。治疗前后用2DUS、CDFI及CEUS观察肿瘤的大小、回声及血流灌注情况,计算肿瘤体积大小及生长抑制率;同时观察不同处理组肝内转移及远处转移情况;并用透射电镜观察肿瘤细胞的超微结构,免疫组化法检测肿瘤组织CD34及PCNA的表达,TUNEL试剂盒检测肿瘤细胞的凋亡情况。结果US+LMLH组肿瘤内部呈混合回声,CDFI及CEUS显示肿瘤的滋养血管明显减少,生长抑制率高于其他各组;在肝内及远处转移方面,US+LMLH组明显优于其他各组;超微结构显示US+LMLH组细胞膜破坏,线粒体明显肿胀;US+LMLH组MVD和PCNA降低、AI升高,与其他各组比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论超声定位辐照载血卟啉微泡的方法能有效介导药物释放,具有较强的体内抑瘤效果,有望成为新的肿瘤化疗给药方式。