球孢白僵菌对亚洲玉米螟毒力检测的研究

论文题目: 球孢白僵菌对亚洲玉米螟毒力检测的研究

论文类型: 硕士论文

论文专业: 微生物学

作者: 刘智辉

导师: 喻子牛,陈守文

关键词: 球孢白僵菌,亚洲玉米螟,生物测定,胞外蛋白酶,胞外几丁质酶,相关性

文献来源: 华中农业大学

发表年度: 2005

论文摘要: 白僵菌属（Beauveria vuillemin）属于半知菌类（Deuteromycotina）、丝孢纲（Hyphomycetes）、丛梗孢目、丛梗孢科、白僵菌属（Beauveria vuillemin）。是现在应用规模和前景仅次于苏云金芽孢杆菌的生物农药。在我国大规模应用主要是防治马尾松毛虫和玉米螟。 本研究以人工饲养的亚洲玉米螟（Ostrinia furnacalis（guenee））幼虫为供试虫，建立了球孢白僵菌的毒力生物测定的标准方法和程序。并通过检验其它方法与生物测定毒力的相关性，验证毒力生物测定的替代或者补充方式。 首先，测定了人工饲养的亚洲玉米螟幼虫的几个生理指标遗传稳定性，其雌雄比、化蛹率、雌蛹重、雄蛹重几个指标的RSD（％）值分别为3.2、4.7、3.1、2.2，遗传稳定。17株球孢白僵菌的1.0×107孢子／ml浓度的分生孢子悬液对人工饲养的亚洲玉米螟5d龄幼虫的最终致死率为76.67～96.67％。确定人工饲养的亚洲玉米螟幼虫遗传性状稳定，对球孢白僵菌中高度敏感，可以用来作为生物测定的标准试虫。 其次，从17个生产和保藏菌株中通过测定其产孢子能力、抗紫外能力、抗高温能力、生长速率、抗杀真菌药剂能力等指标。通过灰关联度分析筛选出SC-2作为标准菌株；应用不同培养基和培养条件培养该菌株，测定其产孢子能力；用不同的干燥和保藏措施处理所得到的菌粉，测定其孢子萌发率和毒力的变化，确定标准品的生产和保藏措施。 摸索各个生物测定条件对生物测定结果的影响，确定了生物测定标准程序中，供试虫的虫龄、样本数量、接种浓度、感染时间、感染湿度等要素，选择以5d龄幼虫为供试虫，接种5个十倍梯度的白僵菌分生孢子悬液，每个处理10头幼虫，3个重复，接种后第5天数死虫数，计算致死率，换算成校正死亡率，查表转化成致死几率值，用最小二乘法计算LC50，通过与标准菌株的LC50的比值，计算每个菌株的效价。 通过重复测定几个菌株孢子粉样品还有6个厂家产品的测定，用生物化学方法对与毒力相关的胞外蛋白酶和胞外几丁质酶的活性进行测定，并检测酶活性与累积致死率和LT50值的相关性，得出在两个酶的活性和对玉米螟的毒力的相关性非常低，不能作为毒力生物测定的替代甚至补充指标。但是通过对同一出发菌株的几株菌的两个酶活性和累积致死率的相关性分析，胞外蛋白酶与累积致死率的最大r2可以达到0.95（6d），具有极高的相关性。说明在遗传关系很近的条件下，胞外蛋白酶作为毒力生物测定的补充指标具有相当的可靠性。

论文目录:

摘要

关键词：

ABSTRACT

KEY WORD：

1.前言

1.1 白僵菌的生物学背景

1.1.1 白僵菌的分类和基本性状

1.1.2 白僵菌的绿色优势

1.2 白僵菌的杀虫机理和杀虫生物化学

1.2.1 白僵菌的致病力及影响因素

1.2.2 侵染途径和致病机制

1.3 白僵菌的应用和生产

1.3.1 白僵菌应用概述

1.3.2 白僵菌的产业化情况

1.3.3 白僵菌现在的生产工艺

1.3.4 白僵菌剂型的研究

1.4 白僵菌制剂标准化的研究进展和检测方法

1.4.1 标准化的总体要求

1.4.2 产品质量标准与质量检验技术

1.5 研究的目的和意义

2.材料与方法

2.1 材料

2.1.1 供试菌株

2.1.2 供试昆虫

2.1.3 培养基

2.1.4药品和试剂

2.1.5 仪器

2.2 实验方法

2.1.1 供试昆虫人工饲养

2.2.2 供试昆虫感染饲料的配制

2.2.3 试剂的配制

2.2.4 菌粉样品制备和干燥保藏方式

2.2.5 供试虫感染和毒力效价的确定

2.2.6白僵菌制剂的其他质量指标的检测

2.2.7 标准菌株的筛选

2.2.8 与毒力相关的几个酶的酶活性测定

3.结果与分析

3.2.1 新鲜菌粉的萌发率

3.3.1 不同干燥措施对标准品质量的影响

3.3.2 不同保藏措施对标准品贮藏时间的影响

3.4 供试虫虫龄的选择

3.5 感染pH值的选择

3.6 感染时间的选择

3.7 处理温度的选择

3.9 重复检测

3.10 厂家产品检测

3.11 液体剂型的检测

3.12 其他替代和补充毒力生物测定方式

3.12.1 胞外蛋白酶和几丁质酶活性的测定

3.12.2 亚洲玉米螟幼虫累积死亡率与球孢白僵菌胞外蛋白酶和胞外几丁质酶活性的相关性分析

4.小结与讨论

5.附件 (毒力测定标准程序的提出)

参考文献

致谢

发布时间: 2006-12-12

参考文献

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