杜仲叶绿原酸的提取、分离纯化及其抗氧化和降脂研究

论文摘要

目的：研究杜仲叶中绿原酸（CGA）的提取、分离纯化工艺；并探讨CGA提取物体外抗氧化和降脂作用及其机理。方法：1.采用纸层析-紫外分光度（UV）法及高效液相色谱（HPLC）法测定CGA含量。2.比较水提法、醇提法、超声提取法、微波提取法对CGA得率的影响,采用单因素实验及正交设计确定最佳提取工艺。3.应用石灰乳沉淀法、溶剂萃取法、醋酸铅沉淀法、壳聚糖法分离CGA,确定最佳分离工艺。比较NKA-9、NKA-Ⅱ、D101、XA-8、XDA-8、 HPD100和HPD826七种大孔树脂的纯化效率,筛选最佳大孔吸附树脂,纯化、冷冻干燥得CGA提取物。4.采用2,2-二苯基-1-苦基肼（DPPH）自由基体系、超氧阴离子自由基体系、羟基自由基体系、烷基自由基引发的亚油酸氧化体系及观察对大鼠红细胞氧化溶血的影响,评价CGA提取物的抗氧化活性。5.采用离体胆固醇（TC）微胶粒体形成实验、3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A（HMG-CoA）还原酶和胰脂肪酶抑制实验,探讨杜仲叶CGA的降脂作用及其机理。结果：1.纸层析-UV法测定的条件：展开剂为正丁醇-醋酸-水（4：1：5）,新华1号纸,展距15cm,紫外光分析仪检视波长254nm, UV检测波长为327nm。HPLC法检测条件：依利特（4.5×250mn:5μm） ODS柱,流动相为乙腈-0.4%磷酸溶液（体积比为13：87）,检测波长为327nm,理论板数按CGA峰计算不低于2000,流速lml/min,柱温30℃,进样量10μl。2.超声法提取最佳工艺：60%乙醇,料液比1:12, pH=5,25khz超声提取2次,每次30min, CGA得率为2.54%。3.壳聚糖和NKA-9大孔树脂最适于杜仲叶CGA粗提物分离和纯化。HPLC法测定杜仲叶提取物CGA含量为42.43%。4.在试验浓度范围内（0.01～0.6mg/ml）,杜仲叶CGA提取物对DPPH自由基、超氧阴离子自由基、羟基自由基有良好的清除效果,对烷基自由基引发的亚油酸体系清除效果差,对大鼠红细胞氧化溶血有较好的抑制作用,其最大抑制率分别为79.53%、81.28%、65.15%、49.78%、77.46%。杜仲叶CGA提取物IC50值分别为0.0140mg/ml,0.0383mg/ml,0.0611mg/ml,0.6487mg/ml和0.0214mg/ml。5.在试验浓度范围内（1×10-5～1mg/ml）,杜仲叶CGA提取物对离体胆固醇微胶粒形成、HMG-CoA还原酶和胰脂肪酶均有抑制作用,并具有剂量依赖性,其最大抑制率分别为96.66%、48.96%、95.20%,对胆固醇微胶粒形成和胰脂肪酶抑制实验的IC50值为0.0648mg/ml、0.0026mg/ml。结论：1.纸层析-UV法及HPLC法联合测定杜仲叶CGA含量具有方法简单、准确、灵敏、重现性好的优点。2.超声法提取CGA效率高,适合大规模工业生产。3.壳聚糖和NKA-9大孔树脂用于分离和纯化杜仲叶CGA提取物效果好,适用于生产工艺路线；4.杜仲叶CGA提取物具有较强的抗氧化活性和降脂作用,可作为潜在的抗氧化和降血脂药物。

论文目录

• 英文缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一章 杜仲叶中绿原酸的提取、分离纯化工艺研究
• 第一节 杜仲叶中绿原酸含量分析方法研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 结论
• 第二节 杜仲叶绿原酸提取工艺的优化研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 结论
• 第三节 杜仲叶中绿原酸的超声提取工艺研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 结论
• 第四节 杜仲叶绿原酸的分离纯化工艺研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 结论
• 第二章 杜仲叶绿原酸提取物体外清除自由基活性研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论与结论
• 第三章 杜仲叶绿原酸提取物降脂机制研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论与结论
• 总结
• 参考文献
• 综述 杜仲药理活性研究进展
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介