论文摘要
目的:胃癌在我国是最常见的肿瘤之一,手术切除是目前胃癌的主要治疗手段。由于没有开展胃癌筛查,许多患者确诊时就已处于晚期而无法进行手术治疗。因而化疗显得尤为重要,化疗不仅能够改善患者的预后,还能提高患者的生活质量。顺铂（cisplatin,DDP）是胃癌化疗中最基础的药物,NCCN治疗指南指出以DDP为基础的联合化疗是胃癌化疗首选方案。然而胃癌的总体预后不佳,化疗的有效率大多在550%之间,其主要原因是肿瘤原发或继发性耐药的产生,致使肿瘤对化疗不敏感,最终导致治疗失败出现进展。虽然对于顺铂耐药的研究揭示了众多的机制,但是随着胃癌SGC7901顺铂耐药细胞株（SGC7901/DDP）的建立,对于胃癌细胞DDP耐药的研究也逐步开始。肿瘤耐药是一个多基因、多因素综合作用的复杂过程。由于肿瘤细胞对一种化疗药物形成耐药的过程中常常也伴随着对其它不同作用机制的抗肿瘤药物产生交叉耐药,因此寻找和筛选参与顺铂耐药的基因将有助于进一步对胃癌获得性耐药的机制的研究。目前、P-糖蛋白（P-gp）、肺耐药蛋白（LRP）、多药耐药蛋白1（MRP1）在胃癌多药耐药机制中研究较多,它们主要通过将化疗药物排出细胞外或改变药物的胞内分布参与肿瘤的多药耐药。切除修复交叉互补基因1（ERCC1）作为NER途径中的一个重要环节,它能够快速修复受损DNA来介导肿瘤细胞对DDP的耐药。同时,近年来研究发现Ras家族蛋白RhoE也参与肿瘤的耐药形成。本研究通过对胃癌SGC7901/DDP细胞株及其亲代SGC7901细胞株的耐药特性进行研究,观察其在获得顺铂耐药过程中对其他抗肿瘤药物敏感性的改变,同时检测耐药相关基因MDR1、LRP、MRP1、RhoE及ERCC1 mRNA及其蛋白在两细胞株中表达的改变,初步探讨胃癌SGC7901/DDP细胞的耐药特性及可能的机制,为胃癌的顺铂耐药逆转提供理论基础。方法:我们采用MTT比色法检测SGC7901/DDP及SGC7901细胞对胃癌化疗常用的药物顺铂（DDP）、紫杉醇（PTX）、5-氟脲嘧啶（5-FU）、阿霉素（ADR）进行药物敏感性检测;并应用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）及蛋白质印记（Western blot）的方法分别从mRNA水平和蛋白水平检测耐药细胞株SGC7901/DDP和亲代细胞株SGC7901的MDR1/P-gp、LRP、MRP1、RhoE和ERCC1的表达异同,初步探讨胃癌耐药机制。结果:1) SGC7901/DDP及SGC7901细胞株对化疗药物DDP、PTX、5-FU、ADR的敏感性:SGC7901/DDP细胞对DDP、PTX、5-FU、ADR的IC50分别为:11.245±0.272mg/L、3.277±0.426mg/L、12.154±2.036mg/L、0.763±0.043mg/L,SGC7901细胞对DDP、PTX、5-FU、ADR的IC50分别为:2.206±0.256mg/L、1.528±0.097 mg/L、4.481±0.544mg/L、0.229±0.020mg/L,其耐药指数分别为:5.08、2.14、2.71、3.33,SGC7901/DDP对四种药物的敏感性显著低于SGC7901细胞（P<0.05）。2)提取RNA的质量检测从胃癌SGC7901/DDP及SGC7901细胞中提取的RNA的浓度分别为: 936.12 mg/L和875.29 mg/L,A260/A280值均在1.92之间,甲醛变性琼脂糖凝胶电泳结果显示:其18S和28S条带清晰,亮度比约为1:2,表明总RNA纯度达到实验要求且无明显降解,可以进行下一步实验。3) RT-PCR法检测MDR1、LRP、MRP1、RhoE和ERCC1的mRNA表达MDR1、LRP、MRP1、RhoE和ERCC1 mRNA在SGC7901细胞中的相对表达量分别为:0.050±0.017、0.689±0.038、0.595±0.064、0.616±0.050、0.410±0.061;在SGC7901/DDP细胞中的相对表达量分别为:0.128±0.039、0.938±0.041、0.655±0.056、0.591±0.076、0.462±0.042。经统计学分析,MDR1、LRP mRNA在SGC7901/DDP细胞中的表达显著高于SGC7901细胞（P<0.05）;而MRP1、RhoE和ERCC1 mRNA在两种细胞株中的表达无显著差异（P>0.05）。4) MDR1、LRP、MRP1、RhoE和ERCC1的蛋白表达MDR1、LRP、MRP1、RhoE和ERCC1在SGC7901细胞中蛋白的相对表达量分别为:0.032±0.096、0.409±0.043、0.144±0.037、0.366±0.056、0.268±0.037,而SGC7901/DDP细胞中的相对表达量分别为:0.118±0.020、0.792±0.075、0.344±0.037、0.651±0.062、0.495±0.053。经统计学分析,五种蛋白在两细胞株中表达差异具有显著性（P<0.05）,MDR1、LRP、MRP1、RhoE和ERCC1在SGC7901/DDP细胞中的蛋白表达水平显著高于SGC7901细胞。结论:1)胃癌SGC7901/DDP细胞对紫杉醇、5-氟脲嘧啶、阿霉素具有交叉耐药性,呈现出多药耐药特性。2) MDR1和LRP mRNA及其编码蛋白在胃癌SGC7901/DDP细胞中的表达均高于SGC7901细胞,MDR1/P-gp和LRP表达改变可能是胃癌SGC7901/DDP细胞产生多药耐药的一个重要机制。3) MRP1、RhoE、ERCC1蛋白在胃癌SGC7901/DDP细胞的表达高于SGC7901细胞,而其mRNA水平无明显差异。MRP1、RhoE、ERCC1蛋白表达的改变可能与胃癌SGC7901/DDP细胞多药耐药密切相关,但其mRNA表达水平与胃癌细胞耐药特性间无明显相关性。MRP1、RhoE、ERCC1基因在翻译成蛋白过程中的调控机制还有待于进一步探讨。
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标签：多药耐药论文;