辣椒素对内脏高敏感大鼠胃酸影响及机制研究

论文摘要

目的：通过观察不同剂量的辣椒素（capsaicin, CAP）对内脏高敏感大鼠胃酸分泌、胃底腺区组织内辣椒素受体（vanilloid receptor subtype 1, VR1）及降钙素基因相关肽（calcitonin gene-related peptide, CGRP）和P物质（substance P, SP）、血浆胃泌素（GAS）和胃粘膜屏障的影响,探讨不同剂量的CAP对内脏高敏感大鼠胃酸的影响及其机制。方法：（1）实验动物分组：60只SD大鼠,雌雄不拘,体重180g～200g之间,随机分为A组（对照组）、B组（模型组）、C1组（CAP1组）、C2组（CAP2组）及C3组（CAP3组）,每组大鼠12只。（2）内脏高敏感大鼠模型的建立：实验大鼠适应性饲养2w,自由进食进水。造模方法：A组腹腔注射生理盐水,1ml/鼠；B组、C1组、C2组和C3组大鼠腹腔注射鸡卵清白蛋白（chicken egg albumin）, 1ml/鼠,制备内脏高敏感大鼠模型。造模过程中观察大鼠一般情况。2w后取A组全部大鼠12只组成正常对照组,随机从B组、C1组、C2组和C3组中抽取共15只大鼠组成模型对照组采用肛门直肠扩张（colorectal distention, CRD）实验以观察大鼠腹部撤离反射（abdominal withdrawal reflex, AWR）,并用AWR评分评估大鼠对直肠扩张刺激的内脏感觉改变。（3）CAP的使用方法及剂量：大鼠造模成功后进行CAP治疗实验,具体方法如下：A组：自由进食进水,生理盐水10mL/kg/d分2次灌胃,连续2w；B组：自由进食进水,生理盐水10mL/kg/d分2次灌胃,连续2w；C1组：自由进食进水,CAP 1mg/kg/d分2次灌胃灌胃,容积为10mL/kg/d,连续2w；C2组：自由进食进水,CAP 5mg/kg/d分2次灌胃灌胃,灌胃容积为10mL/kg/d,连续2w；C3组：自由进食进水,CAP20mg/kg/d分2次灌胃,灌胃容积为10mL/kg/d,连续2w。（4）检测指标及方法：①造模及给药过程中观察大鼠的一般情况。②胃酸的测定：所有大鼠于实验前一夜开始禁食（不禁水）,末次灌胃后1h,用质量分数为2%的戊巴比妥钠（40mg/kg）腹腔注射麻醉,打开腹腔,结扎食管胃连接部和幽门部,将整个胃取出,剪开胃并用生理盐水清洗胃内容物,收集清洗液,用酸碱滴定法测定胃酸。③胃底腺区组织内VR1和CGRP、SP的表达情况：取各组大鼠胃底腺区组织（约0.5cm×0.5cm）全层一块,立刻置于4%的多聚甲醛中充分固定2h,石蜡包埋,连续5μm切片,用免疫组化方法分别进行CGRP、SP、VR1测定。④血浆GAS：心脏采血2ml,4℃离心后提取上清液,用放射免疫法检测血浆GAS水平的变化。⑤胃粘膜屏障改变：把清洗过胃内容物之后的胃置于4%的多聚甲醛中充分固定后,肉眼观察胃粘膜形态,采用Guth标准改良评分评定胃粘膜损伤情况,并取胃粘膜组织送病理组织学检查,光镜下对HE染色后的胃粘膜进行观察。结果：（1）动物一般情况：造模过程中,A组大鼠精神状态好,行动灵活,食欲佳,皮毛光泽,大小便正常,体重增加；B组、C1组、C2组、C3组大鼠出现好斗,易激惹,互相撕咬等情况,但无死亡。随着CAP治疗时间延长,C1组、C2组、C3组大鼠好斗、激惹、互相撕咬情况减少,而B组大鼠无明显减少。在灌胃过程中C1组有5只大鼠、C2组有5只大鼠、C3组有6只大鼠曾出现呛咳,但均无窒息和死亡。（2）AWR评分结果：正常对照组注水1ml、3ml和5ml的AWR评分分别为：0.67±0.50分、1.44±0.53分、2.56±0.53分,模型对照组注水1ml、3ml和5ml的AWR评分分别为：0.53±0.52分、2.53±0.52分、3.40±0.63分。随着气囊体积的增加,正常对照组和模型对照组AWR评分值逐渐递增。模型对照组注水3ml和5ml气囊扩张时AWR评分均显著高于正常对照组（P<0.05）。（3）胃液总酸度的变化：各组大鼠的胃液总酸度分别为：A组48.17±5.75mmol/L,B组45.67±3.05 mmol/L,C1组45.25±2.93 mmol/L,C2组34.42±2.28 mmol/L,C3组30.50±4.25 mmol/L.其中B组大鼠胃液总酸度低于A组大鼠,但没有统计学意义（P>0.05）；C1组大鼠胃液总酸度和B组大鼠胃液总酸度比较没有统计学意义（P>0.05）；随着CAP剂量增加。,C2组大鼠胃液总酸度显著低于A组（P<0.05）,C2组大鼠胃液总酸度显著低于B组（P<0.05）,C2组大鼠胃液总酸度显著低于C1组（P<0.05）；并且随着CAP剂量继续增加,C3组大鼠胃液总酸度显著低于A组（P<0.05）,C3组大鼠胃液总酸度显著低于B组（P<0.05）,C3组大鼠胃液总酸度显著低于C1组（P<0.05）,C3组大鼠胃液总酸度显著低于C2组（P<0.05）。（4）胃底腺区组织内VR1的表达情况：大鼠胃底腺区组织内VRl表达水平分别为：A组为0.58±0.51分,B组为1.25±0.62分,C1组为2.00±0.60分,C2组为2.58±0.52分,C3组为3.25±0.75分,其中A组VR1表达水平显著低于B组（P<0.05）,A组VR1表达水平显著低于C1组（P<0.05）,A组VR1表达水平显著低于C2组（P<0.05）,A组VR1表达水平显著低于C3组（P<0.05）；B组VR1表达水平也显著低于C1组（P<0.05）,B组VR1表达水平也显著低于C2组（P<0.05）,B组VR1表达水平也显著低于C3组（P<0.05）；随着CAP剂量的增加,C2组VR1表达水平显著高于C1组（P<0.05）；C3组VR1水平也显著高于C2组（P<0.05）。（5）胃底腺区组织内CGRP.SP的表达情况：大鼠胃底腺区组织内CGRP表达水平分别为：A组为1.00±0.43分,B组为1.08±0.52分,C1组为1.58±0.52分,C2组为2.17±0.58分,C3组为2.67±0.49分,其中A组CGRP表达水平与B组相比无显著性差异（P>0.05）,A组CGRP表达水平显著低于C1组（P<0.05）,A组CGRP表达水平显著低于C2组（P<0.05）,A组CGRP表达水平显著低于C3组（P<0.05）；B组CGRP表达水平也显著低于C1组（P<0.05）,B组CGRP表达水平也显著低于C2组（P<0.05）,B组CGRP表达水平也显著低于C3组（P<0.05）；随着CAP剂量的增加,C2组CGRP表达水平显著高于C1组（P<0.05）,C3组CGRP水平也显著高于C2组（P<0.05）。大鼠胃底腺区组织内SP表达水平分别为：A组为0.50±0.52分, B组为0.83±0.58分,C1组为0.75±0.45分,C2组为0.75±0.45分,C3组为0.58±0.52分,其中B组SP表达水平较A组略有升高,但没有统计学意义（P>0.05）；其余各组间SP表达水平均没有统计学意义。（6）血浆GAS的变化：大鼠血浆GAS水平分别为：A组49.50±7.51 pg/ml,B组63.25±5.99 pg/ml,C1组44.33±2.90 pg/ml,C2组37.42±3.55 pg/ml,C3组33.00±2.37pg/ml。其中A组GAS水平显著低于B组（P<0.05）,A组GAS高于C1组（P<0.05）,A组GAS高于C2组（P<0.05）,A组GAS低于C3组（P<0.05）；B组GAS水平也显高于C1组（P<0.05）,B组GAS水平也显高于C2组（P<0.05）,B组GAS水平也显高于C3组（P<0.05）；C2组GAS水平相比显著低于C1组（P<0.05）,而C3组的血浆GAS水平显著低于C2组（P<0.05）。（7）胃粘膜屏障：A组、B组、C1组、C2组及C3组的胃粘膜损伤评分（Guth标准改良评分）比较各组间无显著性差异（P>0.05）；光镜下观察胃粘膜组织病理学改变：A组、B组、C1组、C2组大鼠胃粘膜基本光滑,上皮细胞形态正常,排列整齐,未见粘膜脱落、充血、水肿、炎性细胞浸润及腺体结构紊乱和坏死。C3组大鼠胃粘膜上皮细胞轻度脱落、充血、水肿,未见腺体结构紊乱和坏死。对胃粘膜病理损伤程度进行半定量统计,病理损伤积分A组为0.25±0.45分,B组为0.17±0.39分,C1组为0.32±0.45分,C2组为0.33±0.47分,C3组为0.83±0.72分。其中C3组病理损伤积分显著高于A组（P<0.05）,C3组病理损伤积分显著高于B组（P<0.05）,C3组病理损伤积分显著高于C1组（P<0.05）,C3组病理损伤积分显著高于C2组（P<0.05）。结论：1.腹腔注射鸡卵清白蛋白可成功建立大鼠内脏高敏感模型。2.CAP1mg/kgd、5mg /kg/d及20mg/kg/d连续灌胃2w可抑制内脏高敏感大鼠胃酸分泌,并且随着灌胃剂量的增加,抑酸效应增强。3.CAP影响内脏高敏感大鼠的胃酸分泌可能通过激活胃壁内VRl而发挥作用。4.CAP影响内脏高敏感大鼠的胃酸分泌可能与CGRP有关,与SP无明显相关。5.CAP影响内脏高敏感大鼠的胃酸分泌可能与GAS有关6. CAP 1mg/kg/d和5mg/kg/d连续灌胃对正常和内脏高敏感大鼠的胃粘膜屏障无损伤作用,而CAP 20mg/kg/d连续灌胃2w可造成胃粘膜轻微的损伤。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 英文缩略词对照表
• 致谢
• 辣椒素对胃酸分泌的影响及其机制（综述）
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