甲基甲磺酸对不同种泡桐体外植株再生影响研究

论文摘要

本试验首先以毛泡桐、白花泡桐和豫杂一号泡桐组培苗叶片为材料,在三种泡桐叶片最适增殖培养基中添加不同浓度甲基甲磺酸（MMS）进行植株再生;其次,利用三种泡桐组培苗顶芽为材料,在1/2MS培养基中添加不同浓度MMS观察植株形态变化;然后,分别测定了MMS中诱导泡桐叶片愈伤组织和MMS处理泡桐幼苗顶芽的总DNA甲基化水平。研究MMS对泡桐植株再生和幼苗形态的影响,为泡桐的诱变育种和新品种改良奠定一定的理论和技术基础。本试验主要结论如下:1,毛泡桐愈伤组织诱导率与愈伤组织总DNA甲基化水平呈负相关。毛泡桐叶片芽诱导率随MMS浓度的增加而逐渐降低,各处理间芽诱导率差异显著。用200 mg·L-1MMS处理的叶片不能分化出芽。叶片诱导芽在1/2MS培养基中随诱导芽时MMS浓度的增高根诱导率逐渐下降,且抑制根的生长。2,白花泡桐愈伤组织诱导率与愈伤组织总DNA甲基化水平呈负相关。白花泡桐叶片芽诱导率随MMS浓度的增加而逐渐降低。叶片诱导出的芽在1/2MS培养基中随诱导芽时MMS浓度的增高根诱导率逐渐下降,生根数量减少,须根少。3,豫杂一号泡桐愈伤组织诱导率与愈伤组织总DNA甲基化水平呈负相关。豫杂一号泡桐叶片芽诱导率随MMS浓度的增加而逐渐降低,各处理间芽诱导率差异显著。叶片诱导出的芽在1/2MS培养基中随诱导芽时MMS浓度的增高根诱导率逐渐下降,且抑制根的生长。4,经MMS处理三种泡桐幼苗后,泡桐幼苗形态会发生变化,叶片随着MMS浓度的增加而变细长,叶色由绿色或深绿色变至浅绿色,节间变短,生长受到一定程度的抑制。泡桐幼苗根诱导率随MMS浓度的增加逐渐降低,生根数量少,根较粗,且无须根。三种泡桐幼苗顶芽30d时的总DNA甲基化水平随MMS浓度的增高逐渐的升高。泡桐幼苗生根率与泡桐幼苗总DNA甲基化水平呈负相关。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• 1 文献综述
• 1.1 木本植物体外植株再生的途径
• 1.1.1 器官发生的植株再生途径
• 1.1.2 体细胞胚胎发生的植株再生途径
• 1.2 木本植物体外植株再生的机理
• 1.2.1 细胞的减数分裂理论
• 1.2.2 细胞的孤立理论
• 1.2.3 细胞的泛胚论
• 1.2.4 细胞的激素理论
• 1.3 影响木本植物体外植株再生的因素
• 1.3.1 植株基因型
• 1.3.2 外植体的类型
• 1.3.3 基本培养基
• 1.3.4 植物激素
• 1.3.5 培养基中的碳源和氮源
• 1.3.6 培养条件和接种方式
• 1.3.7 DNA 甲基化对体外植株再生的影响
• 1.4 展望
• 2 引言
• 3 材料与方法
• 3.1 试验材料
• 3.2 试验方法
• 3.2.1 泡桐无菌苗的培养
• 3.2.2 MMS 对泡桐叶片芽诱导的影响
• 3.2.3 MMS 对泡桐叶片芽根诱导的影响
• 3.2.4 MMS 对泡桐幼苗形态的影响
• 3.2.5 泡桐总DNA 甲基化水平测定
• 3.2.5.1 泡桐DNA 提取
• 3.2.5.2 泡桐DNA 水解
• 3.2.5.3 标准溶液的配制
• 3.2.5.4 HPLC 仪器及DNA 甲基化测试的条件
• 3.2.5.5 流动相的配制
• 3.2.6 数据处理
• 3.3 主要仪器及试剂
• 4 结果与分析
• 4.1 泡桐总DNA 甲基化水平测定方法
• 4.1.1 戊烷磺酸钠（SPS）对C 和5mC 保留时间的影响
• 4.1.2 高氯酸用量和水解时间对C 标样的影响
• 4.1.3 标准品和泡桐DNA 样品的色谱分离图
• 4.2 MMS 对泡桐叶片体外植株再生的影响
• 4.2.1 MMS 对毛泡桐叶片芽诱导的影响
• 4.2.2 MMS 对毛泡桐叶片愈伤组织总DNA 甲基化水平的影响
• 4.2.3 MMS 对白花泡桐叶片芽诱导的影响
• 4.2.4 MMS 对白花泡桐叶片愈伤组织总DNA 甲基化水平的影响
• 4.2.5 MMS 对豫杂一号泡桐叶片芽诱导的影响
• 4.2.6 MMS 对豫杂一号泡桐叶片愈伤组织总DNA 甲基化水平的影响
• 4.3 MMS 对泡桐根诱导的影响
• 4.3.1 MMS 对毛泡桐叶片芽根诱导的影响
• 4.3.2 MMS 对毛泡桐幼苗的影响
• 4.3.3 MMS 对白花泡桐叶片芽根诱导的影响
• 4.3.4 MMS 对白花泡桐幼苗形态的影响
• 4.3.5 MMS 对豫杂一号泡桐叶片芽根诱导的影响
• 4.3.6 MMS 对豫杂一号泡桐幼苗形态的影响
• 5 结论与讨论
• 5.1 结论
• 5.2 讨论
• 6 参考文献
• Abstract
• 缩写词表