HIF-1α对人肝癌细胞VEGF表达的影响

论文摘要

目的:缺氧是实质性肿瘤微环境的基本特征之一,同时肿瘤细胞的缺氧也是肿瘤发生恶性转化甚至转移的启动因子。缺氧诱导因子-l （hypoxia inducible factor-1, HIF-1 ）是缺氧条件下广泛存在于哺乳动物和人体内的一种转录因子,由HIF-1α和HIF-1β两个亚单位组成,是调节细胞内氧代谢的关键因子之一,其中HIF-1α是主要的氧调节亚基。HIF-1作为一种核转录因子,在哺乳动物的生长发育、生理和病理反应过程中起重要作用。研究证实HIF-1α在肝癌等多种恶性肿瘤中普遍高表达,且与肿瘤的侵袭转移及预后等生物学特性有关。VEGF是HIF-1α的一个主要靶基因,通过调节VEGF的表达、增加肝细胞癌新生血管的生成,从而促进肝细胞癌的侵袭转移。HIF-1活性的调节,可能是治疗很多疾病的切入点。目前有关HIF-1α和VEGF关系的深入研究及以HIF-1α为治疗靶点的研究较少。本研究分别应用HIF-1α抑制剂YC-1[即3-（5’-羟甲基-2’-呋喃基）-1苯甲基引唑]及HIF-1α反义寡核苷酸作用于肝癌细胞株,检测药物干预前后肝癌细胞株SMMC-7721细胞、BEL-7402细胞HIF-1α、VEGF mRNA和蛋白表达的变化,明确HIF-1α对VEGF表达的影响,以及以HIF-1α为治疗靶点的可行性。方法:肝癌细胞株SMMC-7721细胞、BEL-7402细胞分对照组和试验组。对照组细胞常规培养,试验组:分别用HIF-1α抑制剂YC-1、HIF-1α反义寡核苷酸作用于人肝癌细胞,培养24小时后。采用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术,测定干预前后肝癌细胞株SMMC-7721细胞、BEL-7402细胞HIF-1α、VEGF mRNA表达的变化,以β-actin作为内参照标准,通过凝胶扫描仪对扩增产物进行DNA电泳条带的光密度值分析,将HIF-1α、VEGF分别与β-actin比值作为HIF-1α、VEGF mRNA表达水平的参数,对HIF-1α、VEGF mRNA产物相对定量;以Western blot方法检测SMMC-7721细胞、BEL-7402细胞HIF-1α、VEGF蛋白表达的变化,同样以β-actin作为内参照标准,对HIF-1α、VEGF蛋白进行相对定量分析。所有数据均以x±s表示,采用SPSS13.0统计分析软件进行单因素方差分析（ANOVA）和t检验。P<0.05为有显著差异。结果:1在肝癌细胞株SMMC-7721细胞、BEL-7402细胞中,对照组SMMC-7721细胞、BEL-7402细胞HIF-1α、VEGF mRNA的表达显著高于实验组（P<0.05）。2在肝癌细胞株SMMC-7721细胞、BEL-7402细胞中,对照组SMMC-7721细胞、BEL-7402细胞HIF-1α、VEGF蛋白的表达显著高于实验组（P<0.05）。。3在肝癌细胞株SMMC-7721细胞、BEL-7402细胞中,随着YC-1或HIF-1α反义寡核苷酸浓度的增加实验组细胞HIF-1αmRNA的表达量逐渐减少,组间比较差异具有显著性（P<0.05）;随着YC-1或HIF-1α反义寡核苷酸浓度的增加实验组细胞VEGF的表达产物VEGF121（541bp）和VEGF165（408bp）的表达量亦呈减少趋势,组间比较差异具有显著性（P<0.05）,其中VEGF165的表达要明显高于VEGF121。4在肝癌细胞株SMMC-7721细胞、BEL-7402细胞中,随着YC-1或HIF-1α反义寡核苷酸浓度的增加实验组细胞HIF-1α蛋白的表达量逐渐减少,组间比较差异具有显著性（P<0.05）;随着YC-1或HIF-1α反义寡核苷酸浓度的增加实验组细胞VEGF蛋白的表达亦呈减少趋势,组间比较差异具有显著性（P<0.05）。结论:1 HIF-1α、VEGF在肝癌细胞株SMMC-7721细胞、BEL-7402细胞中高表达。说明HIF-1α和VEGF均与肝细胞癌的发生、发展有关。2 YC-1可以在基因和蛋白水平上抑制HIF-1α的表达,并下调VEGF的表达。同样HIF-1α反义寡核苷酸对肝癌细胞HIF-1α表达亦有抑制作用,同时VEGF的表达下降。说明HIF-1α可以促进肝癌细胞VEGF的表达。3在肝癌细胞株SMMC-7721细胞、BEL-7402细胞中,随着YC-1或HIF-1α反义寡核苷酸浓度的增加实验组细胞HIF-1α和VEGF的表达下降,说明针对HIF-1α为靶点的治疗是可行的。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 HIF-1α对人肝癌细胞VEGF 表达的影响
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 缺氧诱导因子-1 与肿瘤血管新生
• 致谢
• 个人简历