激光共聚焦内窥镜对大鼠急性胰腺炎微循环的实验研究

论文摘要

背景和目的急性胰腺炎(AP)为临床常见多发疾病,其中约10%的病人可发展为重症急性胰腺炎(severe acute pancreatits,SAP),其转化过程和发生机制十分复杂,现在比较公认的有以下几大学说:1.胰酶消化学说;2.细胞因子和炎症介质学说;3.微循环障碍学说;4.感染第二次打击学说;5.白细胞过渡激活学说。近年来,胰腺微循环障碍在AP发生发展中的作用越来越受到重视,因为胰腺微循环与胰腺的生理、病理生理密切相关,它涉及到AP以及休克所致胰腺损害的病理过程、胰腺内分泌机能的自身调节以及胰腺内外分泌部之间的机能联系。随实验技术的发展和对AP病理生理的认识,人们观察到胰腺的出血坏死并非完全因为胰酶的组织溶解作用,其中以缺血为特征的胰腺微循环障碍显得较为突出。胰腺的出血坏死是因为胰酶的直接作用,还是胰腺微循环障碍,以及胰腺微循环障碍的始动因子是什么等等问题,已经成为该领域中深入探索的课题。共聚焦激光内窥镜(CLE)是在传统的电子内镜基础上整合了共聚焦激光显微镜而成,具有放大1000倍的能力,现有研究主要用于诊断消化道早期肿瘤,结果提示具有较高敏感性和阳性率。根据CLE的性能特点,我们将其用于对活体大鼠胰腺微循环的研究,通过观察大鼠胰腺微循环及AP时随炎症不同时期胰腺器官的微循环改变情况,以了解共聚焦激光内窥镜的性能,初步评价该设备在急性胰腺炎临床和实验研究的应用前景,希望为胰腺微循环的研究开拓新的方法。方法将32只成年SD大鼠随机分组为正常对照组和实验组。正常对照组8只,进腹后仅对腹部脏器作相应翻动,找出胃、十二指肠、胰腺后,充分暴露胰腺,找到下腔静脉采血后按照4ml/kg注射0.5%荧光素钠,注射完毕时以CLE的头端观察窗孔紧贴大鼠胰腺组织,观察到微循环结构时采集图像并记录;实验组24只又分为12h组、24h组、48h组,进腹找到胰腺,然后找到胆总管,以“0”号丝线结扎胆总管末端制作AP模型,分别在AP模型制作完成后12h(8只)、24h(8只)、48h(8只)再次开腹,先肉眼观察腹腔及胰腺病变情况,找到下腔静脉采血后注射0.5%荧光素钠4ml/kg,注射完毕时以CLE(同对照组方式)观察病变胰腺组织,采集图像并记录。各组均取胰腺组织作病理切片。获得胰腺微循环共聚焦的图像后对其进行分析,并参照相对应的病理图片进行比较分析得出结论。结果①应用结扎胆总管末端的方法,我们复制了AP动物模型,经血清学检测与组织学观察证实其中部分为SAP模型;②应用CLE可以观察到正常的胰腺腺泡结构,胰腺微循环结构清晰可见,能够分辨出毛细血管以及血管中流动的红细胞,并有可能对通过某一毛细血管横切面的红细胞个数进行计数,腺泡结构较微循环的显影效果差;③应用CLE对实验组观察显示:12小时组腺泡结构未见明显改变,微循环毛细血管内可见红细胞流动但流速明显减慢,微循环显影效果较正常组差,但结构与正常组比较无明显差异;24小时组大部分腺泡结构显影模糊,但经过仔细寻找后仍可见结构基本正常的腺泡,能够观察到的完整的微循环结构较12h组明显减少,被观察到的毛细血管内红细胞数量明显减少且流速较12h组慢;48小时组腺泡显影模糊,成片的腺泡不显影,几乎观察不到正常的腺泡结构,很难找到完整的微循环结构,极少能够观察到毛细血管,且血管内罕见红细胞,几乎无红细胞流动。④CLE未能观察到确切的胰岛组织,难以辨识白细胞,不能判断是否有微血栓形成。结论①本研究结果证实CLE对胰腺微循环研究有较大价值,特别是对活体AP微循环血流状态的判断较以往实验方法具明显优势;②CLE对某些组织和血液细胞的分辨能力不足,为疾病的诊断带来困难;③目前CLE所使用的染色剂难以适应不同组织器官的着色要求。

论文目录

• Abstract
• 摘要
• 正文 激光共聚焦内窥镜对大鼠急性胰腺炎微循环的实验研究
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 致谢
• 附图
• 参考文献
• 综述文献共聚焦激光显微内镜的特点及临床应用
• 参考文献
• 硕士在读期间发表的文章