王川徐小平（通讯作者）
(陕西中医学院2011级中药药理学专业研究生712046)
【摘要】目的：研究阿托伐他汀对高脂饮食诱导动脉粥样硬化家兔的血脂和主动脉Toll样受体4影响。方法：建立高脂饮食诱导动脉粥样硬化家兔模型，给药16周后测定血浆胆固醇；处死动物后采用Real-timePCR观察家兔主动脉Toll样受体4的表达。结果：阿托伐他汀对家兔胆固醇的升高有明显的抑制作用，同时降低主动脉中Toll样受体4的表达。结论：阿托伐他汀不仅可以显著降低血浆中的胆固醇，而且可以下调Toll样受体4的表达。
【关键词】动脉粥样硬化阿托伐他汀Toll样受体4
【中图分类号】R965【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）11-0204-01
心血管疾病是目前人类死亡的首要原因，动脉粥样硬化在发病起始和整个过程都伴随着免疫反应的慢性炎症疾病。血脂紊乱是动脉粥样硬化重要的危险因素之一[1]。本文通过Real-timePCR技术观察阿托伐他汀对家兔主动脉Toll样受体4（TLR-4）表达的影响,现汇报如下：
1.材料与方法
1.1试剂
阿托伐他汀（大连辉瑞制药有限公司）；胆固醇测定试剂盒（北京Biosino生物技术和科学公司）；总RNA提取试剂盒(美国OmegaBiotech公司)；一步法反转录试剂盒(大连宝生物工程有限公司)；基因扩增SYBR?Green试剂盒（大连宝生物工程有限公司）。
1.2动物
日本大耳白兔，雄性，4月龄，体重2.0～2.5kg。西安交通大学医学院实验动物中心提供，实验动物使用许可证：SYXK（陕）2007-003。
1.3动物模型的建立
家兔含0.3%胆固醇和3%大豆油高胆固醇饲料饲养一周后后，测量体重和血浆总胆固醇（TC），按TC值分层随机分为两组（n=6）：
①高胆固醇饮食组（对照组）；
②他汀组（0.005%阿托伐他汀），各组药物加入高脂饲料中。家兔连续喂养高脂饲料16周，每天每只家兔限定100g饮食，自由饮水。
1.4血浆胆固醇测定
实验第1周和第16周，禁食后家兔耳缘静脉取血，EDTA抗凝，氧化酶法测定血浆中的TC含量。
1.5Real-time检测mRNA的表达
给药16周后，处死家兔，分离主动脉。使用总RNA提取试剂盒从主动脉中提取总RNA。总RNA按反转录试剂盒说明书进行反转录反应，反转录条件为37℃15分钟，85℃5秒。实时定量PCR反应条件为：预变性95℃30s，PCR反应连续进行40个循环，95℃变性5s，60℃退火30s。引物：
TLR-4：
上5-TGGGCTTAGAACAACTGGAAC-3，
下游5-CAGAACCTGGAGGGAGTAGAG-3；
β-action：
上游5-CGTGCTGTCCCTGTACGCCTCT-3，
下游5-CGCTCGTTGCCGATGGTGAT-3。
1.6统计学处理
采用SPSS18.0软件进行统计学处理，计量资料用均数±标准差表示，两组间比较采用t检验，P<0.05认为有显著性差异。
2.结果
2.1阿托伐他汀对血浆胆固醇水平的影响
实验开始1周时各组家兔血浆胆固醇水平均无明显差异，高胆固醇饮食和给药16周后，对照组家兔血浆胆固醇水平显著升高（表1）。与对照组相比，阿托伐他汀组有明显降低。
表1对胆固醇水平的影响（-x±s）
注：与对照组比较：*P<0.05
3.讨论
大量的研究表明血脂水平与动脉粥样硬化的发生密切相关，血中总胆固醇浓度升高，其中以游离胆固醇升高为主，高血脂是动脉粥样硬化重要的危险因素之一。阿托伐他汀可以显著降低血浆中胆固醇，减少动脉粥样硬化病变。TLR-4是天然免疫系统的一种模式识别受体，TLR-4参与了动脉粥样硬化的发生于发展[2]。本实验表明，阿托伐他汀不仅可以显著降低血浆中胆固醇，而且可能通过下调TLR4受体的表达减少动脉粥样硬化的发生与发展，但具体机制还需要进一步研究。
参考文献
[1]杨永宗.中国动脉粥样硬化病理生理学研究近况[J].中国动脉粥样硬化杂志,2004,12(4):481-489.
[2]顾洪丰,周浩,唐朝克,等.抑制Toll样受体4对apoE-/-小鼠动脉粥样硬化病变的影响[J]生物化学与生物物理学进展,2009;36(9):1165-1171.