小鼠基因sidt2的可变剪接研究及功能初步探讨

论文摘要

RNA干扰（RNA interference,RNAi）是由双链RNA（double strands RNA,dsRNA）引起的序列特异性转录后基因沉默过程,它具有系统性的特性,即该现象可以在细胞或组织间传递,或从亲代传递到子代。线虫sid-1基因是系统性RNAi关键基因,SID-1蛋白可能作为一种膜通道在系统性RNAi中起到转运dsRNA的作用。在大鼠、小鼠、人等多种动物中均存在sid1的同源基因,根据其序列同源性又可分为两个家族sidt1和sidt2,本论文对小鼠sidt2基因的结构和功能进行了相关的初步研究。小鼠sidt2基因包括两条序列,即BC051101和BC023957,它们的编码区仅长度相差63个碱基,因此将其分别命名为sidt2（1）和sidt2（s）。我们通过RT-PCR检测了两条序列的组织表达谱。我们还通过基因组序列比对及PCR对二者进行了染色体定位,并构建可变剪接报告载体,观察其在细胞内的剪接行为,验证了二者为同一基因的可变剪接产物。另外,我们通过RNAi技术研究了剪接因子CLK2、SNRPB及hnRNP A1对sidt2可变剪接的影响,发现当抑制上述剪接因子表达时,内源的sidt2基因的剪接形式并未发生明显变化,推测可能与可变剪接机制复杂、参与其中的剪接因子种类复杂等有关;而hnRNPA1的抑制则会导致可变剪接报告载体载细胞内的转录受到明显抑制。我们还对小鼠sidt2（l/s）进行了蛋白结构预测及亚细胞定位的研究,结果表明SIDT2（L/S）为多重跨膜蛋白,主要定位在细胞的膜系统。根据大鼠与小鼠sidt2（l）基因的高度同源性,我们分离培养了大鼠的原代肝细胞,并通过RT-PCR验证其中sidt2（l）占大多数。siRNA导入实验发现FAM标记的siRNA能够在不借助脂质体的条件下进入大鼠原代肝细胞,提示sidt2（l）基因可能具有协助siRNA导入细胞的作用。

论文目录

• 缩略语
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 1、RNAi现象及其发现
• 2、系统性RNAi及其关键基因——sid-1
• 3、问题:哺乳动物中是否也存在系统性RNAi现象呢?
• 4、可变剪接
• 第一部分 sidt2基因组织表达谱、基因组定位、可变剪接验证及机制初探
• 1.1 组织表达谱及染色体定位
• 1.1.1 实验材料
• 1.1.2 实验方法
• 1.1.3 实验结果
• 1.2 可变剪接验证及其机制初探
• 1.2.1 实验材料
• 1.2.2 实验方法
• 1.2.3 实验结果
• 1.4 讨论
• 第二部分 sidt2基因结构预测、亚细胞定位及基因功能初探
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验方法
• 2.3 实验结果
• 2.4 讨论
• 全文总结
• 参考文献
• 致谢
• 附录
• 附录1.测序图谱
• 附录2.博士期间已发表论文全文