葛根素对H2O2诱导成骨细胞损伤的干预研究

论文摘要

目的观察葛根素（Puerarin,Pue）和过氧化氢（H2O2）在体外对大鼠成骨细胞（osteoblast,OB）增殖、分化和矿化功能的影响,探讨Pue对H2O2诱导OB氧化损伤的保护作用。方法①多次酶消化法分离新生大鼠颅盖骨OB,观察细胞的形态、生物学特点及成骨特性,以碱性磷酸酶（ALP）化学染色、骨钙素（OCN）免疫组化染色等鉴定OB,采用第二代OB进行实验。②随机将细胞分为正常对照组、Pue(10-10～10-3mol/L,“P”)组和H2O2(10-9～10-3mol[/L,“H”)组,应用MTT比色法分别观察第1～4d细胞的增殖,醌衍生物比色法检测诱导分化第2～8dALP的活性,茜素红染色法观察诱导分化第14d Pue组的矿化结节形成并计数。③用“P”预孵育OB 48h,加入0.1mmol/L H2O2（H′）继续孵育24h[P+H′];H′预孵育OB 24h,换“P”孵育48h[H′+P],测定细胞的增殖与ALP活性。④先以10-5mol/LPue（P′）孵育OB 48h,再加入H′24h[P′+H′]后测定细胞内的微量丙二醛（mMDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性和总抗氧化能力（T-AOC）。结果①与正常对照组相比,“P”组中10-8～10-5mol/L的MTT值（P＜0.01）、ALP活性（P＜0.01）和矿化结节的形成（P＜0.05）均增加,且组间两两比较以10-6mol/L组增加更明显（P＜0.01）。MTT值在第1～4d均升高,其中第3d升高最为明显（P＜0.01）,ALP活性的增加主要出现在诱导分化第2d和第4d（P＜0.01）;Pue10-4mol/L组在第2d MTT值升高,诱导分化第4d ALP活性增加（P＜0.01）,第14d矿化结节数无差异（P＞0.05）;Pue10-3mol/L组仅在第1d MTT值减少（P＜0.05）,第2d和4d ALP活性降低（P＜0.01）,第14d矿化结节形成减少（P＜0.05）。②H2O2在低浓度(1×10-8～6×10-5mol/L)时,MTT值（P＜0.05）、ALP活性（P＜0.001）较正常对照组明显升高;在高浓度(1×10-4～1×10-3mol/L)时MTT值、ALP活性明显降低（P＜0.001）,以0.1mmol/L最显著（P＜0.001）。在观察期间H2O2对OB MTT值和ALP活性均有影响,分别在孵育第3d和诱导分化第6d影响最显著（P＜0.001）。③与H′组比较,“P+H′”和“H′+P”组中10-7～10-4mol/L Pue使受损OB的MTT值升高（P＜0.01）10-8～10-4mol/L使ALP活性增加（P＜0.001）,都以10-5mol/L影响更为显著（P＜0.001）,且损伤前加入Pue能起到更好的保护作用（P＜0.001）。④与正常对照组相比,H′组的mMDA含量显著增加而SOD活性和T-AOC显著降低（P＜0.01）;Pue使受损OB的mMDA含量显著减少（P＜0.01）,而SOD活性（P＜0.01）和:T-AOC（P＜0.05）则显著增强,但仍不能使mMDA含量（P＜0.01）、SOD活性（P＞0.05）和T-AOC（P＜0.01）恢复正常。结论①Pue和H2O2对OB的增殖与分化的调节存在双向性。②Pue在体外对H2O2介导OB的氧化损伤具有保护作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 1 活性氧（ROS）的产生与作用
• 2 雌激素缺乏、氧化应激与PMOP
• 3 雌激素、植物雌激素与PMOP的防治
• 4 葛根素与PMOP
• 实验试剂和仪器
• 1 试剂和药物
• 2 主要仪器和设备
• 实验方法
• 1 实验细胞的制备
• 2 实验的不同分组、干预及检测指标
• 3 指标及其检测的原理与方法
• 4 统计学处理
• 实验结果
• 1 成骨细胞的生长与鉴定
• 2 葛根素对成骨细胞增殖、分化及矿化作用的影响
• 2O₂对成骨细胞增殖与分化功能的影响'>3 H₂O₂对成骨细胞增殖与分化功能的影响
• 2O₂致成骨细胞氧化损伤的影响'>4 葛根素对H₂O₂致成骨细胞氧化损伤的影响
• 5 葛根素对成骨细胞mMDA含量、T-AOC和SOD活性的影响
• 讨论
• 1 葛根素对大鼠成骨细胞增殖、分化和矿化作用的影响
• 2O₂对大鼠成骨细胞的影响'>2 H₂O₂对大鼠成骨细胞的影响
• 2O₂造成大鼠成骨细胞氧化损伤的保护和修复作用'>3 葛根素对H₂O₂造成大鼠成骨细胞氧化损伤的保护和修复作用
• 4 葛根素对成骨细胞微量MDA含量、T-AOC和SOD活性的影响
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录
• 中英文术语缩写词表