利用噬菌体展示的p53蛋白表位进行肿瘤检测方面的研究

论文摘要

p53 是一种在肿瘤中突变率很高的抑癌基因,很多情况下 p53 基因的突变产生 p53蛋白血清抗体。在肿瘤早期阶段,即能检测到血清 p53 抗体的存在。因此在肿瘤研究中,p53 抗体成为一种肿瘤特异性的标志物,它对肿瘤发生的及时诊断和大范围人群的肿瘤筛查有重要意义。噬菌体展示技术是一项将外源多肽片段插入丝状噬菌体外壳蛋白从而展示在噬菌体表面的一项生物技术,由于展示的外源多肽依然保持其原有构象及生物学活性,因此可以像一个配子或效应子一样在许多重要的生物系统中发挥作用从而广泛应用于现代生物学的多种领域。在抗体检测方面,噬菌体展示技术可以展示抗原的线性表位,以该杂和噬菌体作为抗原来检测抗体,方法简单、快速,成本低且有较好的特异性和灵敏性。在本研究中,运用噬菌体展示技术将 p53 蛋白的 N 末端 SQAMDDLML 表位展示于噬菌体表面,分析得到的杂和噬菌体的免疫学性质,并以该杂和噬菌体为抗原,用间接ELISA 方法进行血清中 p53 抗体的检测。研究表明,编码 p53 蛋白表位的 DNA 片段插入到 p88 载体,并能成功分泌表达展示有该外源多肽的杂和噬菌体。纯化得到的噬菌体进行 SDS-PAGE 电泳显示展示效率达 20-25%,且达到了理想的纯化要求。将纯化得到的杂和噬菌体进行 Western blot 及 ELISA 分析显示展示的 p53 蛋白表位能特异结合 p53抗体,具有较强的免疫原性。进行肿瘤检测显示对肺癌、耳鼻喉癌、肠癌等的检测有较好的效果,说明以杂和噬菌体为抗原的检测 p53 抗体的方法有可能成为快速、高效、廉价的肿瘤诊断方法。耳鼻喉癌、肠癌. 说明以杂和噬菌体为抗原的检测 p53 抗体的方法有可能成为快速、高效、廉价的肿瘤诊断方法。

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第一章引言

一、p53 研究进展

（一） p53 概述

（二） p53 蛋白的临床意义

（三） p53 抗体的产生

（四） p53 抗体、p53 突变与p53 积累的关系

（五） p53 抗体的临床意义

（六） p53 抗体临床应用存在的问题与展望

二、噬菌体展示技术及其在肿瘤检测方面的应用

（一）丝状噬菌体fd 的形态特征及增殖特点

（二）噬菌体展示技术概述

（三）噬菌体展示技术的优点

（四）噬菌体展示技术的应用

三、本研究的目的与意义

第二章材料和方法

一、实验材料

二、实验方法

（一）噬菌粒的构建

（二）杂合噬菌体蛋白的表达与纯化

（三）杂合噬菌体蛋白所含表位肽段的免疫原性分析

（四）用杂合噬菌体p37 作为抗原对血清中p53 抗体的间接ELISA 检测

第三章结果与讨论

一、实验结果

（一） p53 蛋白 N 端表位肽段的噬菌体展示

（二）噬菌体展示的蛋白抗原表位免疫原性的分析

（三）杂合噬菌体作为包被抗原进行的肿瘤检测研究

二、讨论

结论

参考文献

附录

致谢

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标签：突变论文; 肿瘤检测论文; 抗体论文; 噬菌体展示论文; 表位论文;

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