高糖环境下血管生成素2在肾小球内皮细胞中的表达及生物学作用

论文摘要

目的:通过体外不同条件培养肾小球内皮细胞,观察血管生成素（angiopoietin, Ang）及其受体Tie2、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor ,VEGF）表达变化规律,探讨Ang/Tie2、VEGF对肾小球内皮细胞功能的影响。方法:（1）体外培养小鼠肾小球内皮细胞,采用逆转录聚合酶链式反应（Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction, RT-PCR）方法观察正常糖对照组（D-glucose 5.6mmol/l ,NG）、高渗对照组（Mannitol 25mmol/l+D-glucose 5.6mmol/l, DM）、高糖刺激组（D-glucose 30mmol/l ,HG）不同时间点刺激小鼠肾小球内皮细胞后,Ang1、Ang2、Tie2、VEGF mRNA表达的变化。（2）脂质体分别转染针对Ang2基因的pcDNA3.1-Ang2质粒和Ang2siRNA,24h后RT-PCR法检测肾小球内皮细胞Ang2mRNA表达变化情况。（3）四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）法观察高糖刺激和转染pcDNA3.1-Ang2质粒24h后肾小球内皮细胞的增殖情况。（4）Transwell小室法观察高糖刺激肾小球内皮细胞24h后细胞迁移率变化情况。结果: （1）高糖刺激组Ang1mRNA在12h表达明显抑制,24h、72h、96h表达明显上调,差异有统计学意义,0h、48h较正常对照组表达无明显变化。高糖刺激组Ang2mRNA仅在24h、72h、96h表达明显上调,而在0h、12h、48h与正常对照组比较表达无明显变化。高糖刺激组Tie2mRNA在24h、72h、96h较正常对照组表达明显升高,在0h、12h、48h与正常对照组比较无统计学差异。（2）高糖刺激组VEGFmRNA在24h、72h、96h较正常对照组表达明显升高,在0h、12h、48h与正常组比较无统计学差异（。3）转染pcDNA3.1-Ang2质粒和Ang2siRNA 24h后,pcDNA3.1-Ang2质粒转染组较正常糖对照组Ang2mRNA明显升高,Ang2siRNA转染组较高糖刺激组Ang2mRNA明显抑制,差异有统计学意义。（4） pcDNA3.1-Ang2质粒转染组细胞增殖较正常对照组明显增快,差异有统计学意义。（5）高糖刺激组与正常糖对照组比较,高糖刺激组肾小球内皮细胞迁移率明显升高,与正常糖对照组比较差异有统计学意义。结论:（1）体外培养肾小球内皮细胞可稳定表达Ang1、Tie2、VEGF,高糖可诱导肾小球内皮细胞Ang2mRNA表达。高糖环境可引起肾小球内皮细胞Ang/Tie2、VEGFmRNA表达的改变,并呈时间依赖性。（2）Ang2可促进肾小球内皮细胞的增殖,高糖可促进肾小球内皮细胞的迁移。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢