1，苏州市立医院本部儿科江苏苏州215002；2，郑州大学第一附属医院儿内科河南郑州450052
【摘要】目的观察川崎病（KD）患儿急性期血浆促酰化蛋白（ASP）、脂联素（ADNP）及急相反应蛋白（CRP）水平的变化，探索KD早期诊断的敏感指标及依据。方法将研究对象分为三组，即KD急性期组，呼吸道感染急性发热组和正常健康对照组，每组15例。ELISA方法检测血浆ASP、血浆ADNP浓度，比浊法检测CRP浓度。结果1.KD急性期血浆ASP水平明显高于感染急性发热组和正常健康对照组（P<0.001）。2.KD急性期血浆ADNP水平明显低于感染急性发热组和正常健康对照组（P<0.001）。3.KD患儿恢复期血浆中ASP、CRP水平较急性期明显下降（P<0.001），而ADNP较急性期明显升高（P<0.001）。结论血浆中促酰化蛋白的升高及脂联素水平的降低出现在川崎病血管炎及急性期，血浆中ASP及ADNP水平的检测可能作为KD早期诊断及敏感指标及依据。
【关键词】川崎病；脂联素；促酰化蛋白；急相反应蛋白
ChangesofplasmalevelsofacylationstimulatingproteinandadiponectininchildrenwithKawasakidiseaseandtheirclinicalsignificances
Abstract：ObjectiveToobservethechangesofplasmalevelsofacylationstimulatingprotein（ASP）、adiponectin（ADNP）andC-resetiveprotein（CRP）inchildrenwithKawasakidisease，theninvestigateasensitiveindexforearlydiagnosisafterKD.MethodsTheplasmalevelsofASP、ADNPandCRPweremeasuredin15patientswithKD，15patientsofacuterespiratoryinfectionswithhighfever，and15healthychildren.ELISAtechniquewasadministeredtodeterminetheplasmaASPandADPNconcentrations.PlasmalevelofCRPweredetectedbynephelometricmethods.Results1.PlasmaASPlevelswerefoundincreasingsignificantlyinpatientswithacuteKDcomparedwithinfectedgroupandhealthcontrols（P<0.001）.2.PlasmaADNPlevelsinpatientswithacuteKDweresignificantlylowerthaninfectedgroupandhealthcontrols（P<0.001）.3.PlasmaASPandCRPlevelswerefounddecreasingsignificantlyinpatientswithconvalescentKDcomparedwiththosewithacuteKD（P<0.001），whileplasmaADNPlevelswerefoundincreasingsignificantly（P<0.001）.
ConclusionPlasmaASPlevelsincrease，whileplasmaADNPlevelsdecreaseduringtheacutephaseofKDvasculitis.TheplasmaASPandADNPlevelsmaybeusedasasensitiveindextopredicttheKDinjuries.
Keywords：Kawasakidisease；adiponectin；acylationstimulatingprotein；C-resetiveprotein
川崎病（Kawasakidisease，KD）是一种好发于儿童的急性、自限性的且病因不明的全身性血管炎，主要临床表现为发热、口腔粘膜改变、皮疹、颈部淋巴结肿大、球结膜充血及肢端改变等[1]，其特征为广泛的中小血管炎症，以心血管系统损坏最为严重，主要累及冠状动脉，引起冠状动脉瘤的发生，可能导致心肌梗死，常见于5岁以下小儿，是目前最常见的导致儿童获得性心脏病的病因。KD诊断主要依据临床表现，在2004年美国心脏病协会川崎病诊断指南中推荐了8项实验室指标[2]，但尚无特异性实验室诊断指标，近年来不典型KD病例逐渐增多，给临床诊断带来困难。研究已发现为了应对感染及炎症信号，脂肪细胞分泌多种介质，称为脂肪因子，包括脂联素，IL-6，TNF-α等。脂联素（adiponectin，ADNP）是一种脂肪组织特有的蛋白，在人类血浆中存在丰富，这种脂肪细胞因子与体重指数（BMI）及胰岛素抵抗呈反相关。在肥胖病人、冠心病及2型糖尿病病人中血浆脂联素呈较低水平。脂联素抑制巨噬细胞到泡沫细胞的转化，在动物模型中，提高血浆脂联素的水平会抑制动脉粥样硬化的发展。此外，脂联素抑制粘附分子在内皮细胞的表达，LPS内毒素、脂多糖诱发的表达及巨噬细胞TNF-α的释放。因此，脂联素具有抗动脉粥样硬化及抗炎介质的作用[3]。目前已有许多研究证实，KD急性期存在明显的脂质代谢紊乱和内皮细胞功能失调，循环中促炎细胞因子呈高水平状态，免疫系统呈现显著的激活状态[4、5]。
促酰化蛋白（acylationstimulatingprotein，ASP）是一种脂肪细胞合成的蛋白，其促进甘油三酯的合成，调节脂质代谢。ASP不仅是重要的内源性脂代谢调控激素，还是脂肪细胞中触发早期炎症反应的重要分子之一[6]。
本研究检测KD急性期及恢复期患儿血浆中ASP及ADNP水平，并探讨川崎病中ASP、ADNP及CRP水平的变化及其关系，以期进一步探讨血浆中ASP及ADNP水平的检测作为KD早期诊断的敏感实验室指标的可能。
对象及方法
一、对象
收集2012年1月-2014年12月在我院住院或健康体检儿童45例，分为KD急性期患儿（KD急性期组）15例、呼吸道感染伴急性发热患儿（呼吸道感染组）15例及健康体检儿童（健康对照组）15例，前两组病程均小于2周，体温>38℃，KD急性期组均符合《诸福棠实用儿科学》KD诊断标准[7]；感染组及对照组年龄、性别选择，均依从KD急性期组比例。所有KD病人执行阿司匹林（30mg/kg/天）及单次免疫球蛋白（2g/kg）治疗，并获得所有患儿父母的知情同意。KD急性期组血浆标本在病程4-6天（静脉用丙种球蛋白IVIG治疗前）抽取，KD恢复期血浆标本在病程20-25天抽取。
二、方法
抽取患儿静脉血5ml，以3000r/min的速度离心处理3min后，留取上清液，并置于—20℃中保存备用。1、血浆ASP检测：采用ELISA法测定血浆ASP浓度，试剂由加拿大麦吉尔大学医学中心皇家维多利亚医院心血管实验室提供，严格按照说明书操作。2、血浆ANDP检测：采用采用ELISA法测定血浆ADNP浓度，试剂盒由美国Biovision公司提供。3、血浆CRP检测：在Olympus2型全自动生化分析仪上用比浊法检测。
三、统计学处理
采用GraphpadPrism4.1软件进行统计学分析，各组测定数据采用均数±标准差（mean±S.D.）表示，以配对t检验对实验数据进行分析处理，P<0.05为差异显著。
结果
一、各组临床资料及血浆中ASP、ADNP及CRP水平比较见表1。KD急性期血浆血浆ASP水平明显高于感染急性发热组和正常健康对照组（P<0.001）。而血浆ADNP水平明显低于感染急性发热组和正常健康对照组（P<0.001）。血浆血浆CRP水平明显高于感染急性发热组和正常健康对照组（P<0.001）。
二、KD患儿恢复期与急性期血浆中ASP、ADNP及CRP水平比较见表2。KD患儿恢复期血浆中ASP、CRP水平较急性期明显下降（P<0.001），而ADNP较急性期明显升高（P<0.001）。
讨论
川崎病在儿科越来越受到重视，但到目前为止，川崎病的诊断主要依据临床表现，尚无明确的KD特异性实验室诊断指标，但在KD早期尤其是不典型KD比较难以与一般感染性发热疾病鉴别，而早期诊断，及时与人血丙种球蛋白冲击治疗，可明显降低冠脉扩张的发生率，因而，探索KD特异性实验室诊断指标，早期明确诊断，对KD患儿的治疗至关重要。在本研究中，KD患儿急性期血浆CRP水平明显高于感染急性发热组和正常健康对照组（P<0.001）。已有众多报道KD急性期血浆CRP水平明显升高，与本文结果一致[8]。ASP作为触发早期炎症反应的重要分子之一，本研究发现，KD急性期血浆ASP水平明显高于感染急性发热组和正常健康对照组（P<0.001）。已有研究报道，ADNP抑制TNF-α，CRP的表达及产生，在成人心血管疾病中，ADNP的降低与促炎标志物TNF-α、IL-6的增多密切相关[9]，ADNP在血管壁上，通过抑制过度的炎症应答，对血管重构有内在调节作用[10]。而另一方面，在人类内毒血症中，当血浆中TNF-α、IL-6水平升高时，ADNP水平并没有降低[11]。在本研究中，KD急性期患儿血浆中ADNP水平明显低于感染急性发热组和正常健康对照组（P<0.001）。而与KD急性期比较，KD患儿恢复期血浆中ASP、CRP水平显著下降（P<0.001），而ADNP明显升高（P<0.001）。KD急性期患儿存在的血浆ASP水平升高及低脂联素血症，与脂质代谢紊乱和内皮细胞功能失调、促炎细胞因子的释放及免疫系统的激活密切相关，且ASP及ADNP的变化有统计学意义，由此推测，ASP及ADNP可能成为早期诊断KD尤其是不典型KD的实验室指标。
目前，随着对川崎病的越来越重视，在临床工作中川崎病的早期诊断及临床表现不典型的川崎病诊断仍比较困难，本研究发现KD急性期患儿血浆ASP水平升高，而ADNP水平降低，为探索川崎病早期诊断的实验室指标提供了新的思路，在之后的研究中，还要进一步探讨ASP和ADNP水平的变化与川崎病中冠状动脉损害、冠状动脉瘤的发生之间的关系。
参考文献：
[1]FreemanAF，ShulmanST.Kawasakidisease：summaryoftheAmericanHeartAssociationguidelines[J].AmFamPhysician，2006，74（7）：1141-1148.
[2]NewburgerJW，TakahashiM，GerberMA，etal.Diagnosis，treatment，andlongtermmanagementofKawasakidisease：astatementforhealthprofessionalsfromtheCommitteeonRheumaticFever，EndocarditisandKawasakiDisease.CouncilonCadiovascularDiseaseintheYoung.AmericanHeartAssociation[J].Circulation，2004，110：2747-2771.
[3]SeiichiroTakeshital，HumiyoTakabayashi，NaokiYoshida.CirculatingadiponectinlevelsinKawasakidisease[J].Actapaediatrica，2006，10：1312-1314.
[4]HideoFukunaga，MasahikoKishiro，KatsumiAkimoto，etal.Imbalanceofperoxisomeproliferator-activatedreceptorgammaandadiponectinpredisposesKawasakidiseasepatientstodevelopingatherosclerosis[J].PediatricsInternational，2010，52：795-800.
[5]HyunJungKim，EunHyeChoi，HongRyangKil.AssociationbetweenAdipokinesandCoronaryArteryLesionsinChildrenwithKawasakiDisease[J].JKoreanMedScl，2014，29：1385-1390.
[6]胡亚美，江载芳.诸福棠实用儿科学[M].第八版.北京：人民卫生出版社，2015：785-786.
[7]TomFQ，GauvreauD，LapointeM，etal.Differentialchemoattractantresponsein
adipocytesandmacrophagestotheactionofacylationstimulatingprotein[J].EurJCellBiol.2013；92（2）：61-69.
[8]杨晓东，黄敏.川崎病诊断实验室指标及其临床价值[J].中国实用儿科杂志.2013，28（7）：491-494.
[9]OuchiN，KiharaS，FunahashiT，etal.Obesity，adiponectinandvascularinflammatorydisease[J].CurrOpinLipidol2003；14：561-6.
[10]LiS，BaoHG，HanL.Effectsofadiponectinonmortalityanditsmechanisminasepsismousemodel[J].JInvestSurg，2012，25（4）：214-219.
[11]BehnesM，BrueckmannM，LangS.Alterationsofadiponectineinthecourseofinflammationandseveresepsis[J].Shock，2012，38（3）：243-248.
作者简介：
梁晓燕，女，汉族，主治医师，硕士学位，研究方向为脂质代谢，江苏省苏州市立医院本部儿科，215002，
通讯作者：吴静，女，汉族，主治医师，博士学位，研究方向为脂质代谢.
[基金项目]国家自然科学基金资助项目（项目批准号：81300685）