miRNA在异种移植免疫排斥中作用的体外实验研究

论文摘要

目的：体外研究异种移植免疫排斥过程中miRNA表达的变化,以及相关免疫排斥效应蛋白Gala（1,3）Gal和NF-κB的表达,从而为有效控制异种移植排斥反应奠定实验基础。方法：①培养小鼠血管瘤内皮细胞系（EOMA）,分别加入异种血清,构建异种移植体外模拟实验。实验分组包括大鼠血清组、豚鼠血清组、人血清组,并以PBS作为对照组。②分别于相应时间点收获细胞,采用荧光实时定量PCR技术对各组免疫排斥过程中niR-146a和miR-155的表达变化进行相对定量研究,通过TaqMan miRNA Assays技术对样本进行检测。③并进一步通过实时定量PCR技术检测免疫排斥过程中α（1,3）GT mRNA的表达变化,通过流式细胞术检测Gala（1,3）Gal的表达变化及Western blot技术检测NF-κB （p65）的表达。结果：①大鼠血清组、豚鼠血清组、人血清组niR-146a、miR-155表达水平高于PBS对照组,差异有统计学意义（P<0.05）；豚鼠血清组和人血清组miR-146a表达水平低于大鼠血清组,差异有统计学意义（P<0.05）；豚鼠血清组和人血清组miR-155表达水平高于大鼠血清组,差异有统计学意义（P<0.05）；豚鼠血清组和人血清组组间1niR-146a、miR-155表达水平无统计学差异（P>0.05）。②豚鼠血清组和人血清组α1,3GT mRNA水平高于PBS对照组,差异有统计学意义（P<0.05）；豚鼠血清组和人血清组组间α1,3GT mRNA水平无统计学差异（p>0.05）；而大鼠血清组与PBS对照组之间α1,3GT mRNA水平无统计学差异p>0.05)。③大鼠血清组、豚鼠血清组和人血清组Gala（1,3）Gal的表达水平较PBS对照组均无统计学差异p>0.05)。④大鼠血清组、豚鼠血清组、人血清组的NF-κB（p65）的表达水平均高于PBS对照组,差异有统计学意义（P<0.05）,而三组组间NF-κB （p65）的表达水平无统计学差异（P>0.05）。结论：异种排斥早期出现miR-146a和miR-155的异常上调,参与了异种排斥的多种免疫应答过程。在小鼠与大鼠间的协调性异种排斥中,高水平的miR-146a可能更多的参与了急性血管排斥反应,引起NF-κB （p65）参与的一系列炎症过程。而在小鼠与豚鼠、小鼠与人的非协调性异种排斥中,高水平的miR-155可能更多的参与超急性排斥反应过程,其靶效应包括引起α1,3GT mRNA的升高。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 符号说明
• 前言
• 研究现状
• 研究目的、方法
• 材料与方法
• 一、研究对象
• 二、主要试剂
• 三、仪器设备
• 四、实验方法
• 五、统计学方法
• 结果
• —、异种移植体外模拟实验中miRNA146a、miRNA155的表达情况1.miRNA146a的表达情况
• 二、异种移植体外模拟实验中(xl,3GTmRNA水平检测
• 三、异种移植体外模拟实验中Gala（l，3）Gal表达水平检测
• 四、异种移植体外模拟实验中NFkB（p65）表达水平的检测
• 讨论
• 一、异种移植免疫排斥
• 二、miRNA在异种移植排斥中的作用
• 三、课题研究展望
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 综述
• 综述参考文献
• 致谢