自噬在大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤中作用的实验研究

论文摘要

目的:研究蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage,SAH）后大鼠脑皮层中自噬（autophagy）标志物LC3和Beclin-1的表达变化,探讨自噬在SAH后早期脑损伤（early brain injury,EBI）中的作用。方法:雄性S-D大鼠30只,随机分为对照组、SAH后6h、12h、24h、48h组五组,每组6只,采用视交叉池注血法制得SAH模型,于各时间点处死动物后取颞底脑皮层,利用western blot法和免疫组化法测定自噬标志物LC3和Beclin-1的变化。结果:在对照组脑皮层中LC3和Beclin-1呈低表达;与对照组相比SAH后脑皮层中自噬标志物LC3于6h（P<0.05）后明显升高,24h（P<0.01）达到高峰,约为对照组的11倍,48h（P<0.05）仍有统计学意义;与对照组相比,同样Beclin-1也于6h（P<0.05）后明显升高,24h（P<0.01）达到高峰,约为对照组的2倍,48h（P>0.05）时表达无统计学意义。结论:SAH后脑皮层中自噬途径被激活,并在24h时活性最强,提示自噬在SAH后的EBI中可能起重要作用。目的:探讨大鼠SAH模型中,应用激动剂rapamycin（RAP）增强自噬后观察SAH后早期大鼠神经功能评分、脑水肿和血脑屏障（blood-brain barrier,BBB）通透性的变化,以及应用抑制剂3-Methyladenine（3-MA）减弱自噬后上述指标的变化,进而探讨自噬在SAH后EBI中可能的作用。方法:雄性S-D大鼠60只,随机分为对照组,SAH组,SAH+vehicle组,SAH+RAP组和SAH+3-MA组五组,每组12只,于24h时间点处死动物后取颞底脑皮层,利用western blot法测定自噬标志物LC3和Beclin-1的表达变化,分别观察各组大鼠神经功能评分的变化,并测定各组大鼠脑水肿和BBB通透性的变化。结果:SAH后脑皮层中LC3和Beclin-1表达较对照组明显增加（P<0.01）,同时伴有明显的脑水肿（P<0.01）及BBB通透性的破坏（P<0.01）;与SAH+vehicle组相比SAH+RAP组LC3和Beclin-1的表达明显增加（P<0.05）,脑水肿指数下降（P<0.01）,BBB通透性好转（P<0.01,Evans blue法和IgG法）,同时大鼠的神经功能评分明显好转（P<0.01）;而SAH+3-MA组LC3和Beclin-1的表达明显下降（与SAH+vehicle组相比,P<0.01）,BBB通透性进一步增加（与SAH+vehicle组相比,P<0.05,IgG法）及大鼠神经功能评分变的更差（与SAH+vehicle组相比,P<0.05）。结论:应用RAP干预自噬后,LC3和Beclin-1的表达明显增加,说明自噬被明显增强,同时大鼠神经功能评分明显好转,脑水肿指数明显下降,血脑屏障通透性明显好转,说明增强自噬后减轻SAH后EBI;3-MA的应用可使SAH后EBI的各项指标加重。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 第一部分 大鼠蛛网膜下腔出血后脑皮层中LC3 和Beclin-1 的表达变化
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 第二部分 RAP 干预自噬通路对SAH 后EBI 的保护作用研究
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 展望
• 参考文献
• 附图
• 综述
• 参考文献
• 中英文缩略词表
• 攻读硕士期间公开发表的论文
• 致谢