导读:本文包含了表氧化酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:人参,附子,人参皂苷,乌头碱
表氧化酶论文文献综述
孙佳,张广平,苏萍,马梦,陈腾飞[1]（2019）在《人参附子及其有效成分配伍对心脏表氧化酶CYP2J3、羟化酶CYP4A3和CYP4F11 mRNA表达的影响》一文中研究指出目的:考察人参及其主要成分人参皂苷Rb_1,Rb_2,Re,Rg_1和附子及其主要成分乌头碱配伍后对CYP2J3,CYP4A3和CYP4F11 mRNA表达的影响。方法:连续灌胃(ig)给予人参水提液、附子水提液以及人参附子配伍水提液8 d后取出心脏,用real-time PCR检测各药物处理组心脏CYP2J3,CYP4A3和CYP4F11mRNA表达的改变。用不同浓度的人参皂苷Rb_1,Rb_2,Re,Rg_1、乌头碱及其配伍药物处理H9c2细胞12,24和48 h,MTS法检测细胞的存活率,利用吸光度测定细胞的LDH来评价药物对细胞的损伤程度。人参皂苷Rb_1、Re、乌头碱及其配伍药物处理H9c2细胞24和48 h,用real-time PCR检测人参皂苷Rb_1、Re、乌头碱及其配伍药物对心肌细胞CYP2J3,CYP4A3和CYP4F11 mRNA表达的影响。结果:在动物实验中与空白组相比附子抑制CYP2J3 mRNA表达(P <0. 001),诱导CYP4A3和CYP4F11表达(P <0. 05);人参诱导CYP2J3mRNA的表达(P <0. 01),抑制CYP4A3和CYP4F11的作用(P <0. 001);人参附子配伍抑制CYP2J3 mRNA的表达,但结果弱于附子组,且也抑制CYP4A3和CYP4F11的表达(P <0. 001)。在细胞实验中与空白组相比乌头碱抑制CYP2J3 mRNA表达,诱导CYP4A3和CYP4F11表达。人参皂苷Rb_1,Re和人参皂苷Re乌头碱配伍诱导CYP2J3 mRNA的表达,同时抑制CYP4A3和CYP4F11的表达。结论:人参及其主要单体成分可以通过改变CYP2J3,CYP4A3和CYP4F11转录水平来减少附子及乌头碱对心脏和心肌细胞的毒性。由此可以推测人参及其有效单体成分可以减少由附子及乌头碱引起心脏和心肌细胞损伤。(本文来源于《中国新药杂志》期刊2019年17期）
程铭[2]（2019）在《AA-CYP表氧化酶代谢产物对胰岛β细胞增殖和胰岛素分泌的影响及其机制的研究》一文中研究指出花生四烯酸(Arachidonic acid,AA)经过细胞色素 P450(Cytochrome P450,CYP)表氧化酶途径生成环氧二十碳叁烯酸(Epoxyeicosatrienoic acids,EETs)及20-羟基二十碳四烯酸(20-HETE)。细胞的生长和分化、调节体温及血压等重要的生理作用均有这些代谢产物参与及发挥作用。此外,这些代谢产物在糖尿病等一系列人类重大疾病中,也发挥着相当重要的作用。随着人们对AA及其代谢产物的深入探索,在胰岛β细胞的功能及胰岛素抵抗中,AA及其代谢产物的作用受到了更多的关注和重视。本研究旨在分析AA细胞色素P450表氧化酶代谢产物EETs和20-HETE对胰岛β细胞增殖和胰岛素分泌的影响及其机制,为防治2型糖尿病提供理论依据。本研究以体外培养的胰岛β细胞为研究对象,经过细胞培养、传代和活细胞计数后,用不同浓度EETs和20-HETE处理胰岛β细胞,在培养到12h、24h和48h时,用CCK-8法检测EETs和20-HETE/EETs对胰岛β细胞增殖的影响;western blot检测EETs和20-HETE/EETs对胰岛(3细胞增殖影响的机制;ELISA检测EETs和20-HETE/EETs对胰岛β细胞分泌胰岛素的影响和机制。结果显示:(1)在12h和24h时,浓度为100nM的14,15-EET对胰岛β细胞增殖具有显著促进作用,其中12h时为差异最明显,而其他浓度的EETs和20-HETE的差异不显着。在48h时,各组之间均没有明显差异性。(2)EETs处理组PI3K表达水平显着上升,当20-HETE/EETs联合处理时,PI3K表达水平显着降低;抑制剂处理组显着阻止了 PI3K表达水平,但磷酸化AKT表达水平有较显着增加;PI3K蛋白表达量在11,12-EET和14,15-EET中均无明显差异。(3)在12h、24h和48h时,11,12-EET和14,15-EET均极显着的增强了胰岛β细胞分泌胰岛素的能力,且在48h时最为显着。其中,11,12-EET的作用略占优势。1:1020-HETE/11,12EET组在12h时对胰岛β细胞分泌胰岛素能力有显著影响,但在24h和48 h时不显着。而20-HETE/14,15EET组在叁个时间段均无显着影响。(4)在12h和24h时,11,12-EET组和14,15-EET组的胰岛素含量明显增加,20-HETE/11,12-EET组和20-HETE/14,15-EET组的胰岛素含量无显着增加。分别将11,12-EET和14,15-EET组与相对应的抑制剂组作比较,差异均显着。在48h时,11,12-EET 组、14,15-EET 组、20-HETE/11,12-EET 组和 20-HETE/14,15-EET 组的胰岛素含量均有显着增加。分别将11,12-EET、14,15-EET组、20-HETE/11,12-EET组和20-HETE/14,15-EET组与相对应的抑制剂组作比较,差异均显着。本研究表明,浓度为100nM的14,15-EET呈时间依赖性促进胰岛β细胞的增殖;11,12-EET和20-HETE/EET在促进胰岛β细胞增殖的过程中没有显著作用。11,12-EET和14,15-EET均极显着地增强了胰岛β细胞分泌胰岛素的能力。其中,11,12-EET的作用略占优势。20-HETE/EET对胰岛β细胞分泌胰岛素的能力没有显著的影响。11,12-EET和14,15-EET可能是通过PI3K信号转导通路促进胰岛β细胞胰岛素分泌能力。这些说明11,12-EET和14,15-EET在胰岛β细胞增殖和胰岛素分泌的过程中发挥着重要的作用。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2019-06-01）
陈积雄,黄晓燕,王萍,符秀虹,曾敏[3]（2018）在《细胞色素P450表氧化酶经线粒体途径抗内皮细胞凋亡的机制研究》一文中研究指出目的:研究细胞色素P450表氧化酶对肿瘤坏死因子诱导的内皮细胞抗凋亡的机制。方法:原代培养主动脉内皮细胞(BAECs)2周后,分别转染细胞色素P450表氧化酶基因rAAV-F87V。用肿瘤坏死因子(TNF-α)和放线菌素D(ActD)诱导凋亡,用Western blot法分别检测细胞胞质及线粒体的细胞色素C的含量。以ELISA方法检测Caspase-3、-8、-9的活性。结果:Western Blot结果表明,转染CYP P450表氧化酶后细胞胞质的细胞色素C明显减少,线粒体的细胞色素C明显增加。ELISA结果显示Caspase-3、-8、-9的活性均较对照组明显降低(均P<0.05)。结论:细胞色素P450表氧化酶基因rAAV-F87V抑制内皮细胞凋亡是通过抑制线粒体途径发挥作用的。(本文来源于《临床心血管病杂志》期刊2018年08期）
赵钦烁[4]（2018）在《细胞色素P450表氧化酶2J2及其代谢产物EETs改善心肌梗死后心功能及其机制研究》一文中研究指出研究背景与目的:心肌梗死(Myocardial infarction,MI)是临床上常见的急危重症,以高发病率及高病死率成为威胁人类健康和生命的主要原因,其病理生理基础为冠状动脉粥样硬化性疾病(Coronary atherosclerotic disease,CAD)。冠状动脉粥样硬化性疾病是由于粥样斑块阻塞了冠状动脉,在血管壁激活的炎症不稳定时期会导致斑块的不稳定以致斑块脱落而阻塞冠状动脉时,患者则出现心肌梗死。心肌梗死之后,因受损心肌的修复而发生一系列炎症反应,心肌细胞的坏死与凋亡,血管生成,其中以血管生成对心脏的修复起着至关重要的作用。受损的心脏区域血管生成及供血不足是导致心脏的心室重构且进展为心力衰竭的重要事件。尽管心脏搭桥手术,经皮冠状动脉介入等先进重建血供的治疗手段应用使得一部分病人得到了有效的治疗,但依然有一些病人死亡或者发生了心力衰竭,说明这些治疗方式依然有一些缺点和局限性,比如心肌无复流现象以及术后血管再狭窄和闭塞等。在心梗发生时,心肌细胞氧浓度下降,缺氧诱导因子-1(Hif1-α)蛋白的表达升高会促进心肌自身内在的血管生成,但是这对于维持正常的心脏供血是远远不够的。因此,心肌缺血后的血管生成的治疗对保护心脏功能、改善远期预后以及延缓心力衰竭的进展有着重要的意义。细胞色素P450表氧化酶可将花生四烯酸转化为具有生物活性的环氧二十碳叁烯酸(EETs),这是一群具有心脏保护的代谢产物,其包括四个异构体:5,6-EET,8,9-EET,11,12-EET,和14,15-EET。其主要的代谢产物是11,12-EET和14,15-EET。EETs在可溶性环氧化物水解酶(Soluble epoxide hydrolase,s EH)的水解作用下,EETs被进一步分解为一类化学性质更稳定且生物活性更低的化合物—二羟基-二十碳-叁烯酸(Dihydroxyeicosatrienoic acids,DHETs)。细胞色素P450表氧化酶2J2是唯一存在于人类的CYP2J家族,它在人冠状动脉内皮细胞,平滑肌细胞和心肌细胞都有丰富的表达。之前关于EETs与血管生成的研究很少涉及到心梗后心衰这一领域,因此,本研究主要是为了探索细胞色素P450表氧化酶2J2系统对血管生成的影响及对心衰的预后情况及其可能的机制。研究方法:在动物实验部分,我们采用8-10周内皮特异性过表达CYP2J2的Sprague Dawley雄性大鼠(TG-type,带有Tie2启动子)与同窝出生及周龄相匹配的野生型Sprague Dawley雄性大鼠(Wild-type)随机分为四组:WT-Sham组,TG-Sham组,WT-MI组,TG-MI组。WT-MI组和TG-MI组进行左前降支结扎术,而WT-Sham与TG-Sham组为假手术组,与手术组操作相同只是不结扎左前降支。在心梗8周之后,先给实验大鼠进正电子发射型计算机断层显像(PET)检测心肌血流量,然后进行左心室M超声及左心导管检测。心导管做完后,从实验鼠颈动脉采血,离心后取上层血浆进行ELISA检测。然后取出大鼠心脏拍照,一部分大鼠心脏进行石蜡包埋进行HE染色、Masson染色,WGA染色,另一部分心脏组织用OCT包埋放在-80°C冰箱中进行后续的免疫荧光染色。余下的心脏组织进行Western blotting以及RT-PCR检测。在细胞实验部分,我们将人脐静脉内皮细胞(HUVECs)在常氧和缺氧的条件下培养16个小时,使用CYP2J2的主要代谢产物11,12-EET及其拮抗剂14,15-EEZE干预,来观察11,12-EET对内皮细胞的小管生成作用,更深入的机制研究用Notch1的si RNA和抑制剂DAPT干预进行机制研究。研究结果:一、CYP2J2过表达能够明显减少大鼠心肌梗死后的心梗面积,减轻心梗后梗死周边区心肌细胞的肥厚。二、CYP2J2过表达可以促进血管生成,从而增加心肌血流量来改善心梗后心功能障碍。叁、CYP2J2过表达可以促进11,12-EET、14,15-EET、5,6-EET、的分泌。四、在体外实验中,11,12-EET可以使人脐静脉内皮细胞在常氧和缺氧的情况下增加VEGF-A以及b FGF蛋白的合成以及促进小管生成。五、CYP2J2代谢花生四烯酸产生11,12-EET增加血管生成的机制是通过Notch1/Jagged1通路来完成的,11,12-EET可以促进Notch1在内皮细胞中从胞浆进入胞核,从而作用于促进血管生成的靶基因,而11,12-EET增加胞浆中Notch1表达的机制是在常氧的情况下增加gama-分泌酶的活性,而在缺氧的时候增加gama-分泌酶的生成,从而使Notch1的表达增加。结论:综上所述,内皮细胞特异性过表达CYP2J2可以通过促进血管生成来延缓心力衰竭的进展,其作用机制是通过Notch1/Jagged1通路来实现的。(本文来源于《华中科技大学》期刊2018-08-01）
赖金胜,陈琛,唐家荣,汪道文[5]（2016）在《细胞色素P450表氧化酶2J2及其代谢产物EETs通过PPARα发挥抗心肌肥厚的作用及机制研究》一文中研究指出目的:心肌肥厚是心脏对于压力负荷或者容量负荷所产生的适应性反应。细胞色素P450表氧化酶2J2(CYP 2J2)及其代谢产物EETs可以发挥抵抗心肌肥厚的作用,而其中的机制仍有待进一步探索。方法和结果:在体内研究中,我们采用PPARα缺陷小鼠以及野生小鼠为研究对象,并采用血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导小鼠发生心肌肥厚。结果表明,Ang Ⅱ可以明显诱导心肌肥厚,具体包括心脏肥大、心脏功能减低和心肌肥厚标志物表达增加。而在野生小鼠中,CYP 2J2过表达可以抑制Ang Ⅱ所诱导的心肌肥厚,但是这一抑制作用在PPARα缺陷小鼠则没有体现。在离体研究中,我们以大鼠乳鼠心肌细胞作为研究对象并采用Ang Ⅱ作为诱导因子。研究表明,外源性加入11,12-EET可明显抑制Ang Ⅱ所诱导的心肌肥大,而PPARα特异性阻断剂GW6471可以阻断11,12-EET的作用,并且这一作用可能与Ras/MAPK以及NF-κB通路有关。另外,我们通过荧光报告基因系统以及染色质免疫沉淀实验证实,PPARα可以直接结合到caveolin-1的转录子区,并诱导caveolin-1的表达,而且采用si RNA介导caveolin-1的沉默,可以抑制11,12-EET抵抗Ang Ⅱ的效应。结论:CYP 2J2及其代谢产物EETs可以通过PPARα缓解Ang Ⅱ诱导的心肌肥厚,这一作用可能与其在转录水平上调caveolin-1的表达,并进一步抑制Ras/MAPK和NF-κB通路有关。(本文来源于《中国病理生理杂志》期刊2016年08期）
赵蕙琛[6]（2016）在《P450表氧化酶—环氧二十碳叁烯酸代谢通路在糖尿病皮肤创面难愈性溃疡中的作用与调控机制探讨》一文中研究指出皮肤的难愈性溃疡是糖尿病患者常见的微血管并发症,是糖尿病患者致残、致死的重要因素,目前尚无有效的预防与治疗措施。创面炎症慢性迁延及血管再生障碍是其显着病理特征,也是具有前景的治疗靶点。环氧-二十碳叁烯酸(EETs)是花生四烯酸细胞色素P450表氧化酶(CYP)的代谢产物,具有广泛生物效应,尤其对炎症、血管再生等病生理过程具有重要调控作用。有学者研究发现,糖尿病血管内皮的CYP的表达量低于正常水平。糖尿病难愈性溃疡的形成是否与CYP/EETs代谢通路异常有关?目前尚不清楚。研究目的：本课题利用小鼠皮肤创面模型,比较分析糖尿病及非糖尿病小鼠皮肤创面CYP代谢酶类的表达差异及其与创面愈合指标的相关性；观察外源性EETs、EET拮抗剂对创面愈合的影响,以及对炎症、血管再生相关指标的影响。进一步在糖尿病患者与非糖尿病患者的肉芽组织实验中验证CYP代谢酶类的表达差异与创面愈合的关系。研究内容：构建小鼠背部皮肤损伤模型后,ob/ob小鼠被随机地分为11,12-EET治疗组、EETS拮抗剂治疗组、胰岛素治疗组、生理盐水治疗组,C57BL/6小鼠被注射生理盐水作为对照组。利用Western Blot、real-time PCR、 ELISA、免疫组织化学染色、免疫荧光组织染色等方法,在不同观察时间点,检测小鼠皮肤创面组织P450表氧化酶(CYP2C65、 CYP2J6) mRNA及蛋白表达水平；中性粒细胞浸润数目、单核/巨噬细胞浸润数目、炎症性细胞因子水平,即tumor necrosis factor (TNF)-a, interleukin (IL)-6、IL-1p的水平、金属基质蛋白酶蛋白表达水平以及创面边缘皮肤组织及新生肉芽组织毛细血管密度。并观察外源性EET(11,12-EET)及EETs拮抗剂(14,15-EEZE)干预后上述各项指标的变化及其对创面愈合指标的影响。研究结果：1、与C57BL/6小鼠相比,ob/ob小鼠的CYP2C65和CYP2J6的mRNA表达水平显着降低(P<0.05)；同样,ob/ob小鼠肉芽组织中CYP2C65和CYP2J6蛋白的表达水平与对照鼠相比显着降低(P<0.05)。2、生理盐水干预后,ob/ob小鼠的创面愈合速率显着地慢于C57BL/6小鼠；与生理盐水治疗组的ob/ob小鼠相比,11,12-EET可明显加快ob/ob小鼠的创面愈合(P<0.05)；相反地,EETs拮抗剂可以明显延缓ob/ob小鼠的创面愈合,而胰岛素治疗组与生理盐水治疗组的创面愈合速率无显着差别(P<0.05)。3、ob/ob小鼠创面肉芽组织中中性粒细胞数目及单核/巨噬细胞的数目显着地多于C57BL/6小鼠。在ob/ob小鼠中,11,12-EET相较于生理盐水可显着抑制中性粒细胞及单核/巨噬细胞的浸润数量(P<0.05)。4、ob/ob小鼠肉芽组织中IL-1p、IL-6及TNF-α的水平显著高于C57BL/6小鼠(P<0.05),ob/ob小鼠经11,12-EET治疗后,IL-1β、IL-6及TNF-α水平明显下降(P<0.05),而经胰岛素治疗后IL-1p、IL-6及TNF-α水平变化不大。5、ob/ob小鼠与C57BL/6小鼠相比,MMP-9的蛋白表达量明显升高(P<0.05),经11,12-EET治疗后,MMP-9的蛋白量明显降低(P<0.05),而EET拮抗剂治疗后,MMP-9表达量明显升高(P<0.05)。6、ob/ob小鼠创面的胶原沉积明显少于C57BL/6(P<0.05)。与生理盐水治疗的ob/ob小鼠相比,11,12-EET治疗后创面胶原沉积明显增加(P<0.05)。同时,胰岛素治疗没有表现出明显差别,而EET拮抗剂明显地抑制胶原沉积(P<0.05)。7、创面创立第6天,新鲜的肉芽组织的免疫荧光染色显示ob/ob小鼠的血管样组织明显少于C57BL/6小鼠(P<0.05)。11,12-EET治疗后,ob/ob小鼠的血管样组织相比于生理盐水治疗明显增加(P<0.05),经胰岛素治疗后,数量变化不大。8、将糖尿病与非糖尿病的患者相对比发现,创面肉芽组织中的CYP2C65及CYP2J6蛋白表达量显着地低于正常(P<0.05),但是MMP-9的蛋白表达量显着地高于正常(P<0.05)。研究结论：1、糖尿病小鼠的创面肉芽组织CYP表氧化酶的mRNA及蛋白的表达水平明显降低。2、经EET治疗后,ob/ob小鼠的愈合速率显着增加。3、EET可显着地减少ob/ob小鼠创面肉芽组织中中性粒细胞以及单核/巨噬细胞浸润数目。4、EET可显着地使ob/ob小鼠创面肉芽组织中炎症性细胞因子表达量降低。5、EET显着降地低ob/ob小鼠创面肉芽组织中MMP-9的蛋白表达。6、EET显着增加ob/ob小鼠创面肉芽组织的胶原沉积。7、EET显着可促进ob/ob小鼠创面血管生成。8、糖尿病患者的难愈性溃疡的肉芽组织中CYP2C11及CYP2J2的蛋白表达量显着降低,MMP-9的蛋白表达量显着升高。总之,本研究发现CYP表氧化酶表达水平降低可能是导致糖尿病难愈性溃疡形成的重要因素之一。外源性EET可能通过其抗炎及加速血管再生促进糖尿病皮肤损伤愈合。研究意义：明确EETs/CYP代谢通路是影响糖尿病皮肤损伤愈合的重要因素之一；进一步揭示糖尿病难愈性溃疡的病理生理机制,为临床糖尿病难愈性溃疡的防治提供了新思路及治疗靶点。(本文来源于《山东大学》期刊2016-05-05）
赖金胜[7]（2016）在《细胞色素P450表氧化酶2J2及其代谢产物EETs通过PPARα发挥抗心肌肥厚的作用及机制研究》一文中研究指出研究背景心肌肥厚是心脏对于压力负荷或者容量负荷所产生的适应性反应,是一种缓慢、复杂而且合并诸多因素参与的动态过程,通常是由心脏的基础疾病如心脏瓣膜病、高血压病、先天性心脏病、心肌缺血等导致。心肌肥厚在宏观上主要表现为心室腔缩小、心室壁增厚,而在微观上则以心肌细胞增大、心肌纤维增粗或者成簇样改变为主要表现。在心肌肥厚发生的早期,其可以降低心室壁的压力,维持心脏的功能,保证外周组织器官的血供。然而随着压力或者容量负荷的持续存在,心肌肥厚的进一步进展,伴随着心肌细胞凋亡、心肌纤维化等的发生,其终将发展成心力衰竭,甚至导致死亡。因此,深入探讨心肌肥厚的发生发展机制、寻找心肌肥厚的有效治疗靶点和治疗策略,具有非常重要的意义。花生四烯酸是生物体内含量最为丰富的不饱和脂肪酸之一。它可通过细胞色素P450表氧化酶代谢途径代谢成为环氧二十碳叁烯酸(Epoxyeicosatrienoic acids, EETs)。研究证实,EETs在心血管系统中有着诸多的保护作用,比如EETs可以舒张血管、降低血压,可以抑制动脉粥样硬化以及抑制主动脉瘤形成等。同时,研究还表明,EETs在心肌肥厚的发生发展过程中具有良好的保护作用,可以预防心肌肥厚的发生,甚至达到治疗心肌肥厚以及心力衰竭的目的。然而截至目前,EETs抵抗心肌肥厚的具体作用机制尚未明了。结合国内外的研究,我们推测过氧化物酶体增殖物激活受体α (Peroxisome Proliferator Activated Receptor alpha, PPARa)很有可能介导了EETs的抗心肌肥厚作用。因此,本课题以PPARa缺陷(PPARa null)小鼠作为研究对象,通过重组腺相关病毒(recombinant Adeno Associated Virus, rAAV)系统介导小鼠心脏高表达CYP2J2基因以及对照的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein GFP)基因,并采用血管紧张素Ⅱ (Angiotensin Ⅱ, Ang Ⅱ)皮下微泵植入诱导心肌肥厚,以探讨CYP 2J2过表达对心肌肥厚的作用及其与PPARa的关系,并对其分子机制进行深入探索。研究方法和结果：1.首先,我们在293T细胞中通过叁质粒共转染的方法成功包被携带有CYP 2J2基因和GFP基因的的重组腺相关病毒,即rAAV-2J2和rAAV-GFP,并对其进行纯化。纯化后将其感染细胞检测感染效率,并且通过尾静脉注射注入至动物体内,4周后留取动物的心脏、血液和尿液,采用Western blot技术和real time RT-PCR的方法检测心脏组织中CYP 2J2的蛋白和mRNA的水平,并采用酶联免疫吸附实验检测小鼠血、尿中11,12-EET、11,12-DHET、14,15-EET以及14,15-DHET的水平。结果表明,我们所包被的病毒具有很高的感染效率,而且其可以介导CYP2J2在小鼠心脏中表达,同时与对照组相比,接受rAAV-2J2病毒组的血、尿中EETs和DHETs的水平明显升高。2.为了验证CYP2J2介导的抗心肌肥厚作用是否与PPARα有关,我们以8周大的雄性PPARαnull小鼠以及相同背景的野生(Wild type, WT)小鼠作为研究对象,并通过小鼠尾静脉注射携带有CYP 2J2基因和GFP基因的重组腺相关病毒,采用皮下微泵植入给予Ang Ⅱ (1.5 μg·Kg-1·min-1)持续刺激。两种小鼠均分为如下4组：NS+ rAAV-GFP组、NS+rAAV-2J2组、Ang Ⅱ+rAAV-GFP组、Ang Ⅱ+rAAV-2J2组,每组8只。在Ang Ⅱ干预两周后,通过小鼠超声系统,对小鼠的心室腔大小和心室壁厚度等进行检测。并且通过心导管技术以及Millar系统对小鼠的心脏血液流变学功能进行检测。检测结果表明,无论是在WT小鼠还是PPARa null小鼠中,Ang Ⅱ可以明显的诱导小鼠心脏心室壁增厚,心室腔缩小以及心室内压力最大变化速率降低。同时,在WT小鼠中,CYP 2J2过表达可以明显的抑制Ang Ⅱ的作用,但是在PPARa null小鼠中,CYP2J2却不能发挥抑制Ang Ⅱ的效应。3.在上述检测之后,将动物人性化处死并分离心脏,观察心脏大小,记录心脏重量。采用苏木素-伊红染色以及WGA染色观察小鼠心肌细胞面积,同时应用real time RT-PCR方法对小鼠心脏组织中心肌肥厚标志物(βMHC和BNP)进行检测,并提取心脏的总蛋白和胞浆胞核蛋白组分,采用Western blot技术检测心脏中ERK1/2.MAPK的激活水平,IκBα的表达情况和NFκB的激活情况。结果显示,无论是在野生小鼠还是PPARa null小鼠,Ang Ⅱ可以明显的诱导心脏增大、增重,促进心肌细胞面积增大,诱导心肌肥厚标志物(βMHC和BNP)的表达,并促进MAPK (ERK1/2、MAPKP38)和IκBα的激活,促进NFκB的核转移。而且在WT小鼠中,将Ang Ⅱ+rAAV-GFP组与Ang Ⅱ+rAAV-2J2组相比,CYP2J2过表达可以抑制心脏增大、增重,抑制心肌细胞面积的增大以及PMHC和BNP的表达增加,这一作用可能与其抑制MAPK和NFκB通路的激活有关。然而,在PPARa null小鼠中,CYP2J2过表达却不能发挥类似的效应。4.另外,我们还以大鼠心肌细胞系H9c2细胞以及原代提取的大鼠乳鼠心肌细胞作为研究对象,并外源性加入EETs以及PPARa特异性阻断剂GW6471,观察EETs对于Ang Ⅱ的促心肌肥大的作用。在体外研究中,我们采用F-actin染色观察心肌细胞的面积,并采用real time RT-PCR方法对心肌细胞中PMHC和BNP的表达进行检测,同时提取细胞总蛋白和胞浆胞核蛋白组分,采用Wenstern blot技术检测细胞中Cav-1、ERK1/2、MAPK-P38以及IKBα的激活情况和胞浆胞核NFκB的表达。此外,我们还采用了免疫沉淀的方法,检测细胞中Ras-GTP的表达,即Ras的激活情况。研究结果表明,与对照组相比,单纯Ang Ⅱ刺激可以明显的诱导的心肌细胞增大,诱导细胞中PMHC和BNP的表达增加,同时激活了Ras/MAPK和NFκB通路,而加入11,12-EET干预可以显着的抑制Ang Ⅱ所诱导的心肌细胞增大、抑制βMHC和BNP的表达、抑制Ras/MAPK和NFκB通路的激活,然而11,12-EET拮抗Ang Ⅱ诱导的心肌肥大的这一效应,可以被14,15-EEZE以及PPARa特异性阻断剂GW6471所阻断。同时我们还观察到,11,12-EET干预可以明显的诱导Cav-1的表达,而GW6471则可以阻断11,12-EET的作用。以上结果表明,11,12-EET可以通过PPARa调控Cav-1的表达。5.为了进一步的验证PPARa与Cav-1表达调控之间的关系,我们通过转录预测网站在Cav-1启动子的保守区预测到了PPARa的转录结合位点,构建了含有不同长度的Cav-1的启动子区的截短克隆,通过PPARa在细胞中高表达PPARa并采用荧光报告基因系统检测PPARa是否可以结合Cav-1的启动子区并启动下游基因的表达。同时,我们还使用了染色质免疫沉淀的方法,以Cav-1启动子区的多段引物进行PCR反应,再次验证检测PPARa与Cav-1启动子区是否可以结合。研究结果表明,对于上游500bp(-8到-492)以及上游1250bp(-8到-1278)的截短克隆中,与对照组相比,PPARa高表达组荧光素酶活性显着增高。染色质免疫沉淀的结果也表明,与对照组相比,PPARα高表达组中可以扩增出更多的-199至-455的Cav-1启动子片段,而其他引物所扩增出的产物在两组间没有明显的差异。因此,我们的结果表明,PPARα可以与Cav-1启动子区的-199到-455区域发生结合,促进Cav-1的表达。6.最后,我们在原代提取的大鼠乳鼠心肌细胞中,采用siRNA介导Cav-1的沉默,并使用F-actin染色、real time RT-PCR方法以及Western blot方法观察Cav-1在EET发挥抗心肌肥厚过程中的作用。结果表明,与对照组相比,Ang Ⅱ可以明显的促进心肌细胞面积增大、βMHC以及BNP的表达增加,刺激MAPK和NFκB通路的激活,将Ang Ⅱ组与Ang Ⅱ+11,12-EET组相比,11,12-EET干预可以显着的抑制Ang Ⅱ的效应,但是将Ang Ⅱ+11,12.EET组与Ang Ⅱ11,12-EET+Cav-1 siRNA组相比,Cav-1沉默可以显着的抑制11,12-EET的作用,促进Ang Ⅱ所诱导的心肌肥大.结论：1.在体内研究中,Ang Ⅱ微泵植入可以明显的诱导心肌肥厚,包括心脏的形态学改变(心室壁增厚、心脏增大)、血液流变学改变(心室内压力变化速率下降、心室舒张未期压力增高等)、病理学改变(心肌细胞面积增大)和分子层面改变(心肌肥厚标志物表达增加),而Ang ⅡCYP 2J2过表达可以明显的抑制Ang Ⅱ所诱导的心肌肥厚,并且这一作用可能是由PPARa介导的；2.在离体研究中,Ang Ⅱ干预可以明显的刺激心肌细胞发生心肌肥大,外源性加入11,12-EET可以明显的抑制Ang Ⅱ所诱导的心肌肥大,而这一效应可以被PPARa特异性阻断剂GW6471所阻断。3. CYP 2J2过表达及其代谢产物EETs可以通过激活PPARa,上调Cav-1的表达,进一步抑制Ras的活性以及MAPK(ERK1/2以及MAPK-P38)的激活,同时抑制IκBα的降解以及NFκB-P65亚基的核转移,从而抑制AngⅡ所诱导的心肌肥厚。(本文来源于《华中科技大学》期刊2016-05-01）
何祚雯[8]（2016）在《细胞色素P450表氧化酶2J2及其代谢产物EETs抑制AngⅡ诱导的心脏重构》一文中研究指出研究背景和目的心脏重构是由心脏超负荷或者损伤引起的病理状态,表现为心脏大小、形态和随后的功能变化,这些变化严重影响疾病预后。因此,对心脏重构预防和治疗的研究具有重大的临床意义。CYP2J2代谢花生四烯酸生成EETs。CYP2J2/EETs系统广泛存在于人类的心血管系统中,国内外研究表明CYP2J2/EETs对心血管具有广泛的保护作用,而且极有可能参与了心脏重构的病理生理调节,然而目前对这一科学问题的研究和认识非常有限,故本研究对CYP2J2/EETs系统抗心脏重构的作用和机理进行了系统深入的研究。由于心肌细胞和心肌成纤维细胞在心脏重构的过程中发挥了重要的作用,本研究着重从CYP2J2/EETs对心肌细胞和成纤维细胞的作用方面阐明其抗心脏重构的作用和机制。实验方法及结果8周龄的C57BL/6小鼠(野生型)和aMHC-CYP2J2-Tr小鼠(心肌细胞特异性高表达CYP2J2的小鼠)以1.5μg/kg/min的剂量持续泵入AngⅡ2周。通过液相色谱-串联质谱技术,本研究证实心肌细胞高表达CYP2J2增加了心肌组织和循环血中EETs水平,同时本研究证明心肌细胞特异性高表达CYP2J2抑制了AngⅡ诱导的心肌肥厚、心肌纤维化和心功能不全。CYP2J2的保护作用与激活PPARy和抑制氧化应激/NF-κB及TGF-β1/smad两个通路相关,而CYP2J2的保护作用同时也被PPARy阻断剂GW9662部分阻断。体外实验结果阐明了CYP2J2的代谢产物EETs对心肌细胞和心肌成纤维细胞的作用和机制。首先,在心肌细胞中,11,12-EET抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大、重构相关蛋白(TIMP1、TGF-β1和Collagen I)的表达,其保护作用与激活PPARγ和抑制氧化应激/NF-κB通路相关。与此同时,PPARy的阻断剂GW9662抑制了11,12-EET的心肌细胞保护效应和氧化应激/NF-κB通路,而氧化应激的清除剂NAC发挥了与11,12-EET类似且协同的效应。这表明EETs通过激活PPAR-γ进而抑制氧化应激介导的NF-κB信号通路,最终抑制Ang Ⅱ诱导的心肌细胞肥大和重构相关蛋白表达。此外,被11,12-EET干预后的心肌细胞条件培养液能抑制成纤维细胞的转分化和TGF-β1/Smad信号通路的激活。其次,在成纤维细胞中,11,12-EET直接作用于心肌成纤维细胞,抑制Ang Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖、迁移、转分化和分泌胶原,且NO/cGMP通路的激活和Gα12/13及下游RhoA/ROCK通路的抑制参与了这一过程。而siRNA介导的Ga12/13或RhoA的沉默与11,12-EET发挥了类似效应。与此同时,NO/cGMP通路的抑制剂部分阻断了11,12-EET对Gα2/13的抑制作用。这些结果表明CYP2J2/EETs通过NO/cGMP途径抑制Ga12/13及其下游RhoA/ROCK通路,进而抑制心肌成纤维细胞的纤维化反应。结论CYP2J2/EETs抑制AngⅡ诱导的心脏重构,其机制主要包括对心肌细胞和成纤维细胞的作用。首先,在心肌细胞中,CYP2J2/EETs通过激活PPAR-γ抑制氧化应激进而抑制NF-κBP65入核,从而抑制心肌细胞肥大及重构相关蛋白的表达。另外,EETs通过抑制心肌细胞旁分泌促纤维化因子,进而抑制心肌成纤维细胞的转分化和TGF-β1/Smad信号通路的激活。其次,在心肌成纤维细胞中,CYP2J2/EETs通过NO/cGMP途径抑制Gα12/13及其下游RhoA/ROCK通路,进而抑制心肌成纤维细胞的纤维化反应。本研究系统深入地阐明了CYP2J2及其代谢产物EETs抑制AngⅡ诱导的心脏重构的作用和机制,完善了AA-CYP2J2-EETs系统的相关理论,为干预表氧化酶-EETs途径应用于心脏重构的防治提供了理论依据。(本文来源于《华中科技大学》期刊2016-05-01）
董若兰[9]（2016）在《细胞色素P450表氧化酶2J2及其代谢产物EETs对细菌脂多糖诱导的急性肺损伤时血管渗透性的影响及其机制研究》一文中研究指出研究背景和目的：急性肺损伤(acute lung injury, ALI)是各种致病因素损伤肺泡上皮细胞及微血管内皮细胞,细胞间连接遭受破坏,所造成的以弥漫性间质性肺水肿为主要病理特征,以急性低氧性呼吸功能不全为主要临床特征的综合征,是老年住院患者主要的死亡原因之一。尽管我们普遍认为脓毒血症的病理过程涉及多种炎性细胞的激活、炎性介质的释放以及凝血因子的活化,但最终最直接的死亡原因是其导致的急性肺损伤引起的呼吸窘迫,目前除了机械通气以外,临床尚没有有效的治疗手段,其根本原因是我们对其发病机制缺乏充分的认识。开发出针对脓毒血症性肺损伤的新型有效的治疗方式需要我们对其进行深入的探索和研究。内皮屏障的完整性是脓毒血症急性肺损伤预后的决定性因素,因此改善脓毒血症性肺损伤预后的关键在于维持内皮屏障的稳定性。血管内皮钙黏蛋白VE-cadherin (vascular endothelial cadherin)是内皮细胞与细胞间粘着连接(adherent junction)的主要结构基础,它是一种跨膜受体,其胞外区域与邻近细胞的VE-cadherin相结合,胞内区域通过一系列肌动蛋白结合蛋白((a, β, y and p120 catenins)铆定到细胞骨架MLC(myosin light chain, MLC)上。VE-cadherin的磷酸化和内化,细胞骨架MLC重排产生应力纤维诱导的向心力,最终使相邻细胞分开是增加细胞间渗透性的基本方式。任何能够抑制VE-cadherin以及MLC磷酸化的分子都能够减轻炎症介质诱导的血管渗透性增加。表氧化二十碳叁烯酸(Epoxyeicosatrienoic Acid,EETs)是花生四烯酸(Arachidonic acid,AA)的细胞色素P450表氧化酶(CYP450)代谢产物,其在多种病理状态中均表现出血管保护作用,但关于其是否能增强血管内皮屏障功能及其可能的分子生物学机制尚不得而知。之前关于脓毒血症性肺损伤时肺组织中的炎细胞浸润以及液体渗出情况的研究,大多数将焦点集中在炎症或者炎细胞本身生物学特性的改变,而少有从内皮细胞的角度探索炎细胞浸润的分子机制,而本研究主要是为了探索细胞色素P450表氧化酶2J2(CYP2J2)系统对血管渗透性的影响及其机制。研究方法：在动物实验部分,选取8-12周的雄性CYP2J2过表达以及周龄相匹配的同窝野生型小鼠,随机分成四组：野生组(WT,给予生理盐水腹腔注射)、LPS组(给予细菌脂多糖LPS 10mg/kg腹腔注射)、CYP2J2组(给予生理盐水腹腔注射)、CYP2J2+LPS(给LPS10mg/kg腹腔注射)；除了使用转基因鼠以外,我们还使用EET代谢酶sEH的抑制剂TPPU给小鼠灌胃以进一步证实CYP2J2系统对LPS诱导的血管渗透性的影响。在细菌脂多糖LPS处理后6小时：部分小鼠通过尾静脉以2mg/100g的浓度注射伊文思蓝(Evans blue)染液,1小时之后,通过右心室灌洗清除血管内残留的伊文思蓝,然后取出肺拍照、匀浆经甲酰胺处理后测OD值；部分小鼠行支气管肺泡灌洗,收集灌洗液,离心后取上清检测总蛋白浓度以及相关炎症因子的表达；部分小鼠取出肺组织,或制备石蜡切片,或于-80冻存以备后续的髓过氧化物酶(MPO)活性检测以及western检测。在细胞实验部分,我们使用LPS诱导脐静脉内皮细胞-细胞间发生结构改变,使用sEH抑制剂AUDA来预处理以观察AUDA诱导的内源性EETs增加对LPS诱导的内皮细胞间连接成分改变的作用及其具体的可能的分子生物学机制。一：探讨CYP2J2在内皮细胞中特异性高表达以及sEH抑制剂TPPU对小鼠脓毒血症性急性肺损伤时血管渗透性的作用1.观察腹腔注射LPS后120小时内死亡率,绘制生存曲线2.HE染色：观察肺间质炎细胞浸润情况3.MPO免疫组化：观察肺间质中性粒细胞的浸润情况4.MPO活性检测：肺间质中性粒细胞的浸润情况5.伊文思兰染色和肺泡灌洗液的蛋白浓度测定：检测蛋白的跨血管渗出情况6.肺湿重干重比：检测血浆液体的跨血管渗出情况7. 免疫荧光：NG2、CD31免疫荧光染色观察血管周细胞的数量二、sEH抑制剂AUDA对内皮连接成分的作用其机制1. FITC-右旋糖苷transwell:检测AUDA对LPS诱导的内皮细胞单层渗透性增加的调节作用2. Western blot:检测VE-cadherin的可溶成分和不可溶成分的转换3. Western blot:检测VE-cadherin和MLC的磷酸化修饰4.流式细胞术：检测对LPS对内皮细胞凋亡的作用叁、AUDA调节内皮渗透性的机制探索1. ROCK在AUDA调节内皮渗透性中的作用2.氧化应激在AUDA调节ROCK介导的渗透性变化中的作用3.Src激酶在AUDA调节内皮渗透性中的作用4.Src激酶对LPS诱导的氧化应激的作用研究结果：一、CYP2J2在内皮细胞中特异性高表达缓解了小鼠脓毒血症性急性肺损伤时血管渗透性的增加1. CYP2J2内皮细胞特异性高表达降低了LPS脓毒血症所致的死亡率2. CYP2J2内皮细胞特异性高表达降低了脓毒血症性急性肺损伤所致的肺间质中炎细胞尤其是中性粒细胞的浸润3. CYP2J2内皮特异性高表达降低了脓毒血症性急性肺损伤所致的肺间质液体渗出4. CYP2J2内皮特异性该表达降低了脓毒血症性急性肺损伤所致的肺泡腔蛋白的渗出5. CYP2J2内皮特异性该表达抑制了脓毒血症性急性肺损伤所致的血管周细胞的丢失6.sEH抑制剂TPPU抑制了小鼠急性肺损伤时的血管渗透性增加二、 sEH抑制剂AUDA对内皮连接成分的作用其机制1. AUDA减少了LPS所致的FITC标记的右旋糖酐的跨内皮渗出2. AUDA减少了LPS所致的VE-cadherin由不可溶形式向可溶形式的转化3. AUDA减少了LPS所致的细胞连接成分的磷酸化修饰4. 以上AUDA对内皮屏障的维持作用并不是由减少细胞凋亡来实现的叁、AUDA调节内皮渗透性的机制探索1. AUDA是通过Rho-ROCK来调节内皮渗透性的1) AUDA减少了LPS诱导的Rho活性增加2) AUDA减少了LPS诱导的Rho下游分子ROCK活性的增加,即减少了nypt(肌球蛋白磷酸酶)的磷酸化2. AUDA是通过调节ROS生成来调节Rho-ROCK介导的内皮渗透性改变的1)氧化应激清除剂NAC减少了LPS诱导的ROS生成,缓解了LPS诱导的内皮渗透性增加2)氧化应激清除剂NAC可以缓解LPS诱导的Rho-ROCK活化3) AUDA可以减少LPS诱导的ROS生成以及NOX2表达,与NAC作用相似4) AUDA缓解了H202直接诱导的渗透性改变,与NAC作用相似3. AUDA是通过调节GRP78与Src结合触发的Src活化来调节内皮渗透性的1) AUDA减少了GRP78与Src的结合以及Src的活化2)Src抑制剂PP1缓解了LPS诱导的内皮渗透性增加3)Src抑制剂PP1缓解了LPS诱导的细胞连接成分(VE-cadherin)以及细胞骨架成分(MLC)的磷酸化4.GRP78与Src结合触发的Src活化作用于ROS上游1)Src抑制剂PP1缓解了LPS诱导ROS生成2)Src抑制剂PP1缓解了LPS诱导NOX2表达3)Src抑制剂PP1缓解了LPS诱导ROCK活化结论：一、CYP2J2可以降低脓毒血症性肺损伤,降低死亡率,抑制脓毒血症性急性肺损伤所致的血管渗透性增加二、 CYP2J2可以减少细胞粘着连接成分VE-cadherin的磷酸化,以及细胞骨架MLC的磷酸化,从而减少细胞连接的开放叁、 CYP2J2稳定内皮细胞间粘着连接的作用是通过抑制GRP78介导的Src活化,减少ROS生成,从而降低Rho-ROCK通路的活化来实现的关于AUDA如何调控GRP78与Src相互作用的机制,待后期实验进一步探讨。(本文来源于《华中科技大学》期刊2016-05-01）
戴梅艳[10]（2016）在《CYP表氧化酶2J2及其代谢产物EETs调节巨噬细胞极化改善高脂饮食诱导的胰岛素抵抗》一文中研究指出研究背景和目的胰岛素抵抗是指正常数量的胰岛素不足以产生对胰岛素效应靶器官或组织包括脂肪细胞、肝细胞和肌肉细胞等的正常胰岛素反应,从而导致高胰岛素血症和高血糖或葡萄糖不耐受的状况。肥胖是导致胰岛素抵抗最常见的原因,而肥胖诱导的脂肪组织慢性低级别炎症在胰岛素抵抗的发生发展中发挥重要作用。脂肪组织巨噬细胞浸润与极化与脂肪组织慢性炎症及其诱导的胰岛素抵抗有着密切的关系。调节脂肪组织巨噬细胞聚集与极化可为临床防治胰岛素抵抗提供新的靶点。花生四烯酸细胞色素P450表氧化酶代谢花生四烯酸(AA)产生四种不同的环氧-二十碳叁烯酸(Epoxyeicosatrienoic acids, EETs,分别为5,6-EET,8,9-EET,11,12-EET, 14,15-EET), EETs在可溶性表氧化物水解酶(soluble epoxide hydrolase, sEH)的作用下水解生成相应的二羟二十碳叁烯酸(dihydroxyeicosatrienoic acids, DHET);生物体内细胞色素P450表氧化酶-EETs-sEH-DHET构成一个完整的代谢系统而发挥其生物学功能。初步的研究发现,内源性细胞色素P450表氧化酶抑制了单核细胞的激活,调节巨噬细胞极化,改善LPS诱导的心功能失常。巨噬细胞作为免疫系统重要组成部分,具有形态可塑性和功能多样性的特点,在炎症发生发展过程发挥重要作用；而高脂饮食诱导的肥胖小鼠处于一种持续慢性低级别的炎症状态,脂肪组织内巨噬细胞聚集促进炎症的进展,CYP2J2-EETs-sEH代谢通路能否通过调节巨噬细胞功能状态发挥抗炎、改善胰岛素抵抗的作用,及其作用机制有待进一步深入研究。在本研究中,我们假设CYP2J2-EETs-sEH代谢通路通过调节巨噬细胞聚集和极化,减轻炎症从而改善肥胖小鼠的胰岛素抵抗。方法和结果首先,建立高脂饮食(60 Kcal% Fat)诱导的小鼠胰岛素抵抗模型,应用Mini-pump将EETs (11,12-EET与14,15-EET)持续输入模式动物体内,持续4周,观察EETs对肥胖小鼠胰岛素抵抗的影响,研究EETs通过抗炎的机制改善模式动物胰岛素抵抗的作用。结果显示：高脂饮食喂养成功诱导小鼠肥胖模型,Mini-pump泵入11,12-EET和14,15-EET能够缓解高脂饮食诱导的小鼠体重的增加；改善血糖,血胰岛素,血胆固醇及甘油叁酯的水平;降低血清中炎性细胞因子(IL-1β、IL-6、MCP-1)的表达；改善高脂饮食诱导的糖耐量异常和胰岛素敏感性；11,12-EET和14,15-EET能够明显降低脂肪组织含量,降低脂肪组织MAPK和NF-κB炎症信号通路表达和改善胰岛素下游信号P-AKT表达水平。其次,CYP2J2基因过表达或者sEH抑制剂TUPS间接提高小鼠体内EETs水平,研究其对高脂饮食诱导的胰岛素抵抗小鼠脂肪组织炎症的效应及机制。结果显示：CYP2J2基因过表达或者sEH抑制剂TUPS均能增加小鼠体内EETs水平；抑制高脂饮食诱导的小鼠体重的增加；改善糖脂代谢；改善高脂饮食诱导的糖耐量异常和胰岛素敏感性；降低血清炎性细胞因子和血中炎性单核细胞的水平；调节脂肪组织巨噬细胞M1/M2极化平衡并调节相关表面分子的表达,最终改善脂肪组织炎症信号通路和胰岛素信号。最后,体外实验探索外源性EETs抑制FFA诱导的巨噬细胞极化的作用及其分子机制。LPS和FFA均能诱导巨噬细胞迁移,而脂肪组织来源的条件培养基能够明显增加巨噬细胞的迁移能力,11,12-EET和TUPS明显抑制巨噬细胞的迁移。此外,EETs能够明显的抑制LPS和FFA诱导的巨噬细胞M1型极化,促进IL-4诱导的M2极化。进一步探索EETs调节巨噬细胞极化作用的机制,表达谱芯片分析和验证结果提示cAMP-EPAC信号通路可能起到重要作用。利用EPAC特异性的cAMP激动剂8-CPT-2'-O-Me-cAMP可以发现,在巨噬细胞中增加EPAC的表达与FFA刺激均可促进MAPK和NF-κB信号的表达,EETs则可以通过抑制EPAC进而抑制下游的炎症信号。结论1.EETs能够明显改善高脂饮食诱导的小鼠肥胖和胰岛素抵抗。2.EETs改善高脂饮食诱导的胰岛素抵抗作用是通过调节脂肪组织巨噬细胞聚集和极化平衡,抑制炎症而实现的。3.EETs可能是通过抑制cAMP-EPAC信号通路实现调节巨噬细胞极化和抑制炎症的作用。(本文来源于《华中科技大学》期刊2016-05-01）
表氧化酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
花生四烯酸(Arachidonic acid,AA)经过细胞色素 P450(Cytochrome P450,CYP)表氧化酶途径生成环氧二十碳叁烯酸(Epoxyeicosatrienoic acids,EETs)及20-羟基二十碳四烯酸(20-HETE)。细胞的生长和分化、调节体温及血压等重要的生理作用均有这些代谢产物参与及发挥作用。此外,这些代谢产物在糖尿病等一系列人类重大疾病中,也发挥着相当重要的作用。随着人们对AA及其代谢产物的深入探索,在胰岛β细胞的功能及胰岛素抵抗中,AA及其代谢产物的作用受到了更多的关注和重视。本研究旨在分析AA细胞色素P450表氧化酶代谢产物EETs和20-HETE对胰岛β细胞增殖和胰岛素分泌的影响及其机制,为防治2型糖尿病提供理论依据。本研究以体外培养的胰岛β细胞为研究对象,经过细胞培养、传代和活细胞计数后,用不同浓度EETs和20-HETE处理胰岛β细胞,在培养到12h、24h和48h时,用CCK-8法检测EETs和20-HETE/EETs对胰岛β细胞增殖的影响;western blot检测EETs和20-HETE/EETs对胰岛(3细胞增殖影响的机制;ELISA检测EETs和20-HETE/EETs对胰岛β细胞分泌胰岛素的影响和机制。结果显示:(1)在12h和24h时,浓度为100nM的14,15-EET对胰岛β细胞增殖具有显著促进作用,其中12h时为差异最明显,而其他浓度的EETs和20-HETE的差异不显着。在48h时,各组之间均没有明显差异性。(2)EETs处理组PI3K表达水平显着上升,当20-HETE/EETs联合处理时,PI3K表达水平显着降低;抑制剂处理组显着阻止了 PI3K表达水平,但磷酸化AKT表达水平有较显着增加;PI3K蛋白表达量在11,12-EET和14,15-EET中均无明显差异。(3)在12h、24h和48h时,11,12-EET和14,15-EET均极显着的增强了胰岛β细胞分泌胰岛素的能力,且在48h时最为显着。其中,11,12-EET的作用略占优势。1:1020-HETE/11,12EET组在12h时对胰岛β细胞分泌胰岛素能力有显著影响,但在24h和48 h时不显着。而20-HETE/14,15EET组在叁个时间段均无显着影响。(4)在12h和24h时,11,12-EET组和14,15-EET组的胰岛素含量明显增加,20-HETE/11,12-EET组和20-HETE/14,15-EET组的胰岛素含量无显着增加。分别将11,12-EET和14,15-EET组与相对应的抑制剂组作比较,差异均显着。在48h时,11,12-EET 组、14,15-EET 组、20-HETE/11,12-EET 组和 20-HETE/14,15-EET 组的胰岛素含量均有显着增加。分别将11,12-EET、14,15-EET组、20-HETE/11,12-EET组和20-HETE/14,15-EET组与相对应的抑制剂组作比较,差异均显着。本研究表明,浓度为100nM的14,15-EET呈时间依赖性促进胰岛β细胞的增殖;11,12-EET和20-HETE/EET在促进胰岛β细胞增殖的过程中没有显著作用。11,12-EET和14,15-EET均极显着地增强了胰岛β细胞分泌胰岛素的能力。其中,11,12-EET的作用略占优势。20-HETE/EET对胰岛β细胞分泌胰岛素的能力没有显著的影响。11,12-EET和14,15-EET可能是通过PI3K信号转导通路促进胰岛β细胞胰岛素分泌能力。这些说明11,12-EET和14,15-EET在胰岛β细胞增殖和胰岛素分泌的过程中发挥着重要的作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
表氧化酶论文参考文献
[1].孙佳,张广平,苏萍,马梦,陈腾飞.人参附子及其有效成分配伍对心脏表氧化酶CYP2J3、羟化酶CYP4A3和CYP4F11mRNA表达的影响[J].中国新药杂志.2019
[2].程铭.AA-CYP表氧化酶代谢产物对胰岛β细胞增殖和胰岛素分泌的影响及其机制的研究[D].内蒙古农业大学.2019
[3].陈积雄,黄晓燕,王萍,符秀虹,曾敏.细胞色素P450表氧化酶经线粒体途径抗内皮细胞凋亡的机制研究[J].临床心血管病杂志.2018
[4].赵钦烁.细胞色素P450表氧化酶2J2及其代谢产物EETs改善心肌梗死后心功能及其机制研究[D].华中科技大学.2018
[5].赖金胜,陈琛,唐家荣,汪道文.细胞色素P450表氧化酶2J2及其代谢产物EETs通过PPARα发挥抗心肌肥厚的作用及机制研究[J].中国病理生理杂志.2016
[6].赵蕙琛.P450表氧化酶—环氧二十碳叁烯酸代谢通路在糖尿病皮肤创面难愈性溃疡中的作用与调控机制探讨[D].山东大学.2016
[7].赖金胜.细胞色素P450表氧化酶2J2及其代谢产物EETs通过PPARα发挥抗心肌肥厚的作用及机制研究[D].华中科技大学.2016
[8].何祚雯.细胞色素P450表氧化酶2J2及其代谢产物EETs抑制AngⅡ诱导的心脏重构[D].华中科技大学.2016
[9].董若兰.细胞色素P450表氧化酶2J2及其代谢产物EETs对细菌脂多糖诱导的急性肺损伤时血管渗透性的影响及其机制研究[D].华中科技大学.2016
[10].戴梅艳.CYP表氧化酶2J2及其代谢产物EETs调节巨噬细胞极化改善高脂饮食诱导的胰岛素抵抗[D].华中科技大学.2016