人染色体3p、9p、14q微卫星变异与肾细胞癌的相关性研究

论文摘要

【目的】了解在中国汉族人群中染色体3p、9p、14q上微卫星变异在肾细胞癌患者中发生的频率,研究染色体3p、9p、14q上微卫星变异与肾细胞癌临床病理特征之间的关系,并探讨这些微卫星位点的变异与肾透明细胞癌预后的关系,寻找肾透明细胞癌预后相关的生物标记物,为提高肾细胞癌的诊断和治疗水平奠定基础。【方法】1.采集2004-2006年临床新鲜肾细胞癌手术标本及1995-2006年石蜡切片标本82例,初选出位于染色体3p、9p、14q上的D3S1289、D3S1560、D3S1566、D3S1300、D3S1633、D9S168、D9S171、D9S157、D9S1749、D14S1426、D14S617和D14S260共计12个微卫星位点,然后根据抽取的部分标本PCR成功率和变异率,从中筛选出具有代表性的微卫星位点;比较PCR-变性聚丙稀酰胺凝胶电泳-银染,PCR-SSCP-EB染色,PCR-中性聚丙稀酰胺凝胶电泳-EB染色和测序四种检测微卫星变异的方法,选出简便、快捷、准确的方法鉴定肾细胞癌患者的原发病灶或转移病灶在微卫星位点是否有变异,分析微卫星变异与临床指标间的关系。2.对已鉴定微卫星不稳定及杂合性缺失的原发性肾透明细胞癌首发患者电话随访肾癌根治术后转移、存活的情况,以首次肾透明细胞癌诊断为起始事件,分别以肾癌转移、肾癌相关的死亡为终点事件计算生存期,随访终止日期为2007年4月23日。采用log-rank检验方法进行单因素生存分析,绘制Kaplan-Meier法生存曲线;采用Cox比例风险模型从多因素中筛选更有意义的预后因素。【结果】1.四种检测方法对同一例患者的肾癌与癌旁样品检测D3S1560位点微卫星变异情况,检测结果一致。对27对样品（肾癌癌组织和配对的自身癌旁组织）作了测序,4对测序失败,其余测序微卫星不稳定检测结果与PCR-中性聚丙稀酰胺凝胶-EB染色微卫星不稳定检测的结果比较发现,82.6%（19/23）检测结果一致,17.4%（4/23）检测结果不一致,一致性检验得Kappa=0.706,且经检验总体Kappa指数不为零,说明PCR-中性聚丙稀酰胺凝胶-EB染色与测序两种检测方法检测结果一致性比较好。根据31名肾癌患者的癌和癌旁组织标本微卫星变异检测结果,最终选定D14S1426、D14S617、D3S1289、D3S1560和D9S168五个代表性的位点继续检测余下标本的微卫星变异情况。一名肾癌再生病例第一次患肾癌（左肾）时D14S617、D14S1426、D3S1289、D3S1560和D9S168五个位点均没有发现异常,但第二次患肾癌（右肾）时发现D3S1289位点LOH。12名病人的原位肾癌和自身配对的肾癌转移标本微卫星变异检测结果比较表明相同个体肾癌原发组织和转移癌组织之间在D14S1426、D14S617、D3S1289、D3S1560和D9S168微卫星变异没有统计学差异（P＞0.05）。69名肾癌患者在D14S617、D14S1426、D3S1289、D3S1560和D9S168五个位点均有不同频率的变异发生,变异率最高的是D9S168,最低的是D14S1426。有21.7%病例同时出现两个以上位点变异。x2检验69名肾细胞癌患者在不同性别、年龄、组织病理学分型、TNM分期及有无其他部位转移情况下D14S1426、D14S617、D3S1289、D3S1560和D9S168的MSI及LOH发生率的差异,发现P值均大于0.05。2.经log-rank检验发现D14S617（P=0.207）,D14S1426（P=0.331）,D3S1289（P=0.918）,D3S1560（P=0.981）与肾透明细胞癌转移率无关,D9S168（P=0.001）与肾透明细胞癌转移率有关;D14S617（P=0.237）,D14S1426（P=0.218）,D3S1289（P=0.965）,D3S1560（P=0.974）与肾透明细胞癌生存率无关,D9S168（P=0.003）与肾透明细胞癌生存率有关。Cox回归分析性别、年龄、淋巴结转移、早晚期、D9S168对肾透明细胞癌远处转移快慢和肾透明细胞癌生存期的影响,结果发现D9S168对肾透明细胞癌远处转移发生快慢和肾透明细胞癌生存期的影响具有统计学意义,其相对危险度分别为15.08（95%CI,1.67～136.15）,13.37（95%CI,1.49～120.16）。【结论】1.PCR-中性聚丙稀酰胺凝胶电泳-EB染色的方法是一种检测微卫星变异的简便、低廉并且可靠的好方法。2.在D14S1426、D14S617、D3S1289、D3S1560和D9S168这五个位点附近可能存在与肾癌相关的抑癌基因或错配修复基因,这些基因的失调增加了肾癌的易感性。3.D9S168可能是肾透明细胞癌预后的一个独立的生物标记。存在D9S168变异的肾透明细胞癌的癌细胞具有比较强的转移侵袭能力,也许在此位点附近有肾透明细胞癌转移相关的特异基因,D9S168变异相关基因的克隆将为今后肾癌的基因疗法取得突破提供线索。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 主要英文缩写词表
• 前言
• 参考文献
• 第一部分 肾细胞癌染色体3p、9p、14q微卫星变异分析
• 一、材料
• 二、方法
• 三、结果
• 四、讨论
• 参考文献
• 第二部分 染色体3p、9p、14q微卫星变异对肾透明细胞癌预后影响
• 一、材料
• 二、方法
• 三、结果
• 四、讨论
• 参考文献
• 总结
• 综述
• 参考文献
• 硕士研究生期间发表文章
• 研究生期间参与的其他科研工作
• 附录
• 致谢