开封地区桂花炭疽病菌的生物学特性及病菌毒素性质的研究

论文摘要

?炭疽病（anthracnose）是桂花上经常发生的一种危害性较大的病害,其发生严重时可造成桂花叶片的枯死、脱落甚至可导致整个树体的死亡,严重影响桂花的经济价值和观赏价值。对采自河南开封市的桂花炭疽病的标样进行组织分离和致病性分析,共确定10个菌株为桂花炭疽病的病原菌,编号依次为L1～L10。这些菌株在形态上极为相近。根据分离菌的形态特征和致病性,并结合其rDNA-ITS区域的序列分析,将桂花炭疽病的病原菌鉴定为胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporiodes）。对病原菌的生物学性状的测定结果表明:病菌在10-35℃内均可生长,最适温度为28℃;病菌在pH 3-11之间均可生长,最适pH为6,弱酸性条件有利于病菌产孢;不同光环境对其生长、产孢及孢子萌发率的影响不大;果糖和葡萄糖做碳源时菌丝体生长较好,可溶性淀粉能促进产孢;有机氮源有刺激该菌产孢的作用,而在硫酸铵为氮源的培养基上菌丝体虽能生长,但不易产孢。分生孢子的致死温度为50℃10 min或55℃5 min,菌丝的致死温度为60℃30 min或65℃5 min。一些常用杀菌剂对病菌的室内毒力测定的结果表明:嘧菌酯对病菌的菌丝生长的抑制作用较强,并对该病菌的分生孢子的萌发亦具有较好的抑制效果,从而为该病的化学防治提供了一定的理论依据。病原菌在液体培养基振荡培养时可产生对桂花叶片具有致枯性的毒素类物质,其引起的毒性症状与病菌在自然条件下造成症状类似。研究表明该毒素的活性成分主要为多糖类物质,该物质对热较稳定。测定了毒素的粗提物对桂花叶片作用后细胞膜透性、丙二醛MDA含量、以及抗坏血酸酶（APX）、过氧化物酶（POD）和过氧化氢酶（CAT）活性的变化情况。结果表明,毒素作用后能引起桂花叶片细胞膜透性上升,膜脂过氧化程度加强,MDA含量上升;叶片的POD、APX和CAT的活性均较对照降低。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 前言
• 1.1 桂花病害的研究现状
• 1.2 炭疽属真菌的研究进展
• 1.2.1 炭疽菌属的分类
• 1.2.2 rDNA ITS 序列及其在炭疽菌属分类中的应用
• 1.2.3 炭疽病菌的生物学性状研究进展
• 1.3 植物病原真菌毒素的研究进展
• 1.3.1 病原菌毒素的种类
• 1.3.2 毒素的生物活性测定方法
• 1.3.3 毒素的提取纯化及结构鉴定
• 1.3.4 毒素作用机理研究进展
• 1.3.5 毒素的应用
• 1.4 本研究的内容、目的和意义
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 供试菌株
• 2.1.2 培养基
• 2.1.3 药品试剂
• 2.1.4 仪器设备
• 2.2 方法
• 2.2.1 桂花炭疽病病原菌的分离与鉴定
• 2.2.2 病菌生物学性状的测定
• 2.2.3 常用杀菌剂对病菌的毒力测定
• 2.2.4 病菌体外毒素的初步研究
• 2.2.5 毒素作用机理研究
• 3 结果与分析
• 3.1 病原菌的分离与鉴定
• 3.1.1 桂花炭疽病的危害与症状观察
• 3.1.2 病原菌的分离纯化
• 3.1.3 致病性测定
• 3.1.4 病原菌的形态特征与鉴定
• 3.1.5 rDNA-ITS 序列分析
• 3.2 病原菌生物学特性的研究
• 3.2.1 不同培养基对菌丝生长和产孢的影响
• 3.2.2 碳、氮源对菌丝生长和产孢的影响
• 3.2.3 温度对菌丝生长、产孢和孢子萌发的影响
• 3.2.4 pH 值对菌丝生长、产孢和孢子萌发率的影响
• 3.2.5 光照对菌丝生长、产孢和孢子萌发率的影响
• 3.2.6 菌丝和分生孢子致死温度测定
• 3.3 杀菌剂对桂花炭疽病菌的毒力测试
• 3.3.1 杀菌剂对炭疽病菌菌丝生长的抑制作用
• 3.3.2 杀菌剂对炭疽病菌分生孢子萌发的抑制作用
• 3.4 病菌体外毒素的研究
• 3.4.1 病菌培养滤液的致病作用
• 3.4.2 炭疽病菌毒素的生物活性测定方法
• 3.4.3 毒素产生条件的研究
• 3.4.4 病菌培养滤液液中毒素基本性质的测定
• 3.4.5 粗毒素的理化性质测定
• 3.5 毒素对桂花叶片细胞生理生化的影响
• 3.5.1 毒素对桂花叶片电解质渗漏率的影响
• 3.5.2 毒素对桂花叶片 MDA 含量的影响
• 3.5.3 毒素对桂花叶片 CAT、POD 及 APX 活性的影响
• 4 结论
• 5 讨论
• 5.1 关于桂花炭疽病菌的鉴定
• 5.2 胶孢炭疽菌（C. gloeosporiodes）的生物学特性
• 5.3 关于炭疽病菌毒素
• 参考文献
• 图版
• 致谢