山东省猪繁殖与呼吸综合症的流行病学调查

山东省猪繁殖与呼吸综合症的流行病学调查

论文摘要

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome, PRRS)自1987年首次于美国爆发,主要引起母猪的流产,如死胎和木乃伊胎以及各种年龄猪的呼吸道疾病。其病原为猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus, PRRSV),该病毒首先于1991年由荷兰Wensvoort分离(Wensvoort G,1991),1995年郭宝清等首次从国内疑似PRRS的猪群到PRRSV,从而证实我国也有PRRSV的流行,随后在我国大部分地区相继检出PRRSV。2006年秋季全国爆发的无名高热病已被确定主要由变异的PRRSV引起的猪繁殖与呼吸综合征。为了解山东省PRRSV的流行情况,本研究重点从血清学和病原学方面进行研究,从而为本病的预防控制提供理论依据。本研究主要包括以下几方面内容:1、利用IDEXX公司猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)抗体检测试剂盒对山东省不同地区共16个规模化免疫的猪场的601份猪血清和8个未免猪场的227猪血清进行抗体检测,结果未免疫猪群均为PRRS抗体检测阳性,并且超过半数(51.98%)的被检个体PRRS抗体阳性,弱毒疫苗免疫猪场猪个体抗体阳性率达到90.65%,灭活苗免疫猪场猪个体抗体阳性率仅达到75.49%。研究结果表明山东省规模化猪场PRRS感染比较严重,对于预防PRRS而言,弱毒疫苗的体液免疫应答效果要优于灭活疫苗。2、病毒的分离与鉴定:通过RT-PCR方法对2006年10月至2007年9月送检的167份临床病料进行了PRRSV检测,共鉴定出133份PRRSV阳性病料,阳性率达79.64%。这些病例主要表现为病猪体温高达40.5~42.0℃,超过90%的病例表现为呼吸道症状或繁殖-呼吸道症状,多数病猪皮肤发红,伏卧,嗜睡。病理变化主要表现为淋巴结水肿、出血(100%)和弥漫性肺炎(约占88.0% ),还有部分表现为肠壁变薄、脾脏轻度出血。本研究将80份阳性病料,通过在Mark-145细胞上增值,共分离到52个猪场的PRRSV毒株,其中检测出高致病性变异株23株。研究说明PRRSV是引发临床猪高热病的主要病原之一,但尚无法判定高致病性PRRSV变异株就是近来生猪高死亡疫情的主凶。3、PRRSV ORFR5~7基因的克隆测序与序列比较:从分离的52株病毒中按不同地区挑选6株,用3对引物分别对这6株分离株的ORF5-ORF7进行了RT-PCR扩增,克隆及测序,将序列进行拼接得到长为1473bp的基因片断。在这6株山东分离株之间及LV,VR-2332, BJ-4,CH-1a株的ORF5~7基因进行序列比较。结果表明6个毒株的基因型与北美洲型相近,与国内CH-1a属于同一亚型,但3株高致病性PRRSV山东分离株与3株非高致病性PRRSV山东分离株之间并无明显的差异规律,但在基因亚群的分型上存在明显的地域特征。

论文目录

  • 缩略词说明
  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 引言
  • 一 病原学
  • 1 病原特点
  • 2 PRRSV的基因组结构
  • 3 PRRSV基因组所编码的蛋白
  • 4 PRRSV 基因的遗传演化
  • 二 PRRS 流行病学
  • 1 传染源
  • 2 传播途径
  • 3 流行规律
  • 4 PRRSV的持续感染
  • 5 PRRSV继发感染
  • 三 PRRS免疫学
  • 1 PRRS发病机理
  • 2 体液免疫
  • 3 细胞免疫
  • 四 临床症状与病理变化
  • 1 临床症状
  • 2 病理变化
  • 五 PRRS 的诊断和检测技术
  • 1 病原分离诊断
  • 2 血清学检测技术
  • 3 PRRSV的分子生物学研究技术
  • 六 PRRS 防治技术
  • 1 灭活疫苗
  • 2 弱毒疫苗
  • 3 基因工程疫苗
  • 研究内容
  • 实验一 山东省规模化猪场繁殖与呼吸综合征抗体检测与分析
  • 1 材料与方法
  • 1.1 被检血清
  • 1.2 ELISA 检测试剂盒
  • 1.3 检测方法
  • 2 结果与分析
  • 3 讨论
  • 实验二 山东省流行PRRSV 野毒株的分离与鉴定
  • 1 材料与方法
  • 1.1 材料
  • 1.1.1 病料
  • 1.1.2 试剂
  • 1.2 方法
  • 1.2.1 RT-PCR检测可疑病料中PRRSV的方法
  • 1.2.2 病毒分离
  • 1.2.3 病毒的鉴定
  • 2 结果与分析
  • 2.1 RT-PCR 检测可疑病料中 PRRSV 的结果
  • 2.2 病毒分离与鉴定
  • 3 讨论
  • 实验三 部分PRRSV山东分离毒株ORF5-7 基因的克隆及序列分析
  • 1 材料与方法
  • 1.1 材料
  • 1.1.1 病料
  • 1.1.2 试剂
  • 1.2 方法
  • 1.2.1 RT-PCR 方法对ORF5,ORF6,ORF7 进行扩增
  • 1.2.2 PCR 产物胶回收
  • 1.2.3 DH5a 感受态细胞的制备
  • 1.2.4 基因克隆
  • 1.2.5 转化质粒的抽提
  • 1.2.6 重组质粒 pMD-ORF5 、pMD-ORF6、 pMD-ORF7 的鉴定
  • 2 结果与分析
  • 3 讨论
  • 结论
  • 参考文献
  • 致谢
  • 攻读硕士期间发表的论文
  • 相关论文文献

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