微小RNA-34a在喉鳞状细胞癌的功能研究及临床意义

微小RNA-34a在喉鳞状细胞癌的功能研究及临床意义

论文摘要

目的生存素(Survivin)具有强大的抗凋亡作用,被认为是肿瘤基因治疗的理想靶点。微小RNA-34a (miR-34a)通过负向调控某些肿瘤中特定基因的表达而发挥抑癌因子的作用。因此,本研究旨在探讨miR-34a和Survivin在喉鳞状细胞癌(LSCC)中相互作用的关系。方法1.采用脂质体把miR-34a类似物导入人喉鳞状细胞癌细胞系Hep-2细胞中,以提高Hep-2细胞中miR-34a的表达水平。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测Hep-2细胞的增殖情况,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测miR-34a对Survivin蛋白表达的影响,流式细胞术检测细胞周期的变化。2.实时定量聚合酶链反应(PCR)检测喉鳞状细胞癌中miR-34a及Survivin信使RNA的表达水平,并分析其表达水平与喉鳞状细胞癌的病理分化,淋巴结转移,临床分期及生存率的关系。结果1. miR-34a可以明显的抑制Hep-2细胞的增殖,并且可以在不影响Survivin信使RNA的表达水平的情况下明显下调Survivin蛋白的表达。此外,miR-34a使Hep-2细胞的细胞周期阻滞在G0/G1期。2.喉鳞状细胞癌组织标本结果表明,miR-34a在肿瘤组织中是低表达的,而Survivin是高表达的。miR-34a的表达水平与喉鳞状细胞癌患者的病理分化,淋巴结转移,临床分期负相关,与生存率正相关。结论miR-34a可能通过靶向Survivin与喉鳞状细胞癌的发生密切相关,在喉鳞状细胞癌的发生发展中起着重要作用。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 引言
  • 1 研究内容和技术路线
  • 1.1 研究内容
  • 1.1.1 基础细胞实验
  • 1.1.2 临床标本实验
  • 1.1.3 结果分析
  • 1.2 技术路线
  • 2 材料与方法
  • 2.1 材料
  • 2.1.1 主要仪器
  • 2.1.2 主要试剂及耗材
  • 2.1.3 喉鳞状细胞癌组织及癌旁组织标本
  • 2.1.4 细胞株
  • 2.2 方法
  • 2.2.1 细胞培养
  • 2.2.2 细胞转染
  • 2.2.3 四甲基偶氮唑蓝(MTT)分析
  • 2.2.4 总 RNA 的提取及实时定量 PCR 反应
  • 2.2.5 蛋白免疫印迹(Western blot)
  • 2.2.6 细胞周期分析
  • 2.2.7 统计分析
  • 3 结果
  • 3.1 miR-34a 抑制 Hep-2 细胞的增殖
  • 3.2 miR-34a 转录后翻译水平调控 Survivin 的表达
  • 3.3 miR-34a 对 Hep-2 细胞增殖周期的影响
  • 3.4 miR-34a 抑制 Hep-2 细胞中 CyclinA 及 CyclinD1 的表达
  • 3.5 miR-34a 和 Survivin 在喉鳞状细胞癌组织中的表达情况
  • 3.6 miR-34a 和 Survivin 的表达水平与喉鳞状细胞癌患者临床与病理特征的关系
  • 3.7 生存分析
  • 4 讨论
  • 参考文献
  • 附录A 缩略词
  • 附录B 综述
  • 参考文献
  • 在学研究成果
  • 致谢
  • 相关论文文献

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