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人类疱疹病毒8型的K1和K15亚型与新疆Kaposi肉瘤的相关性研究

2020-11-27阅读(884)

人类疱疹病毒8型的K1和K15亚型与新疆Kaposi肉瘤的相关性研究

论文摘要

目的:明确新疆KS感染HHV-8的K1亚型和K15等位基因型,并初步探讨新疆KS不同临床分型及临床表现与不同HHV-8亚型的相关性。方法:使用酚-氯仿-异戊醇法对新疆维吾尔自治区人民医院收集的27例KS石蜡包埋组织进行HHV-8 DNA抽提,并使用巢式PCR扩增K15基因片段并测序,确定K15等位基因型;同时使用巢式PCR扩增K1基因片段并测序,利用Clustal W程序对根据DNASTAR软件翻译出的K1位点氨基酸序列进行序列比对,根据比对结果运用PHYLIP软件包对K1位点进行系统发生学分析,确定HHV-8K1亚型;最后运用Fisher确切概率法对结果进行统计学分析处理。结果:（1）27例新疆KS中有22例HHV-8感染为阳性,阳性率为81.50%,其中4例AIDS-KS患者HHV-8感染均为阳性,感染率100%;（2）基于K1基因位点系统进化树分析发现,18例为K1-C亚型（其中15例为C2,2例为C3,另1例不能明确其分支）,4例为K1-A型（其中1例为A1,另3例不能明确其分支）;基于K15位点,20例为P基因型,2例为M基因型;（3）新疆HHV-8各病毒株K1氨基酸序列（121aa,包括VR1及其附近序列）间的差异性为0～23.31%,A和C亚型病毒株K1氨基酸序列间差异性为7.58%～23.31%（平均差异性14.86%）;（4）新疆4例AIDS-KS患者感染的HHV-8亚型分别为K1-A1、C2和C3,并且均为K15 P等位基因型,而仅有的2例K15 M等位基因型HHV-8感染者均为经典型KS患者;（5）不同HHV-8 K1亚型之间KS患者粘膜损害有显著差异性（P<0.05）,A亚型HHV-8感染者粘膜损害率明显高于比C亚型感染者（分别为75%和11.11%,P<0.05）;（6）新疆经典型KS和AIDS-KS患者之间不同HHV-8 K1亚型或K15等位基因型感染率的差异性无统计学意义（P >0.05）。结论:（1）新疆KS患者感染的HHV-8亚型主要属于K1-C亚型和K15 P等位基因型,并且以C2/P嵌合型为主,也存在部分的K1-A亚型和K15 M等位基因型感染者,其中A亚型和K15等位基因型为国内首次报道;（2）A亚型比C亚型HHV-8对粘膜更具有侵袭性;（3）新疆KS患者感染的不同HHV-8 K1亚型以及K15等位基因型与KS临床类型之间均无明显的相关性。

论文目录

  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 英文缩略语表
  • 前言
  • 材料与方法
  • 1 材料
  • 1.1 组织标本的收集
  • 1.2 试剂来源
  • 1.3 实验溶液配制
  • 1.4 PCR 引物来源
  • 1.5 主要的实验仪器设备
  • 2 方法
  • 2.1 病毒DNA 提取
  • 2.2 巢式PCR 扩增
  • 2.3 电泳鉴定
  • 2.4 双向测序
  • 2.5 DNA序列编辑及翻译
  • 2.6 系统发生学分析
  • 2.7 参照的核苷酸序列GenBank编码
  • 3 数据处理
  • 结果
  • 1 KS 的临床特点
  • 2 K1 和K15 基因位点PCR产物电泳结果
  • 3 K1和K15基因位点PCR产物测序结果
  • 4 实验所检目的基因部分序列
  • 5 K1片段的氨基酸序列比对结果
  • 6 系统进化树
  • 7 K1氨基酸序列之间的差异性
  • 8 HHV-8 的K1亚型、K15等位基因型与新疆KS相关因素的关系分析
  • 8.1 新疆KS患者的一般临床资料与HHV-8亚型分布的关系
  • 8.2 不同 K1亚型HHV-8与KS患者粘膜损害的关系
  • 8.3 不同 K1亚型HHV-8与新疆经典型KS及AIDS-KS患者之间的相关性
  • 8.4 不同K15等位基因型HHV-8与新疆经典型KS及AIDS-KS患者之间的相关性
  • 讨论
  • 1 新疆KS及其感染HHV-8的流行病学状况
  • 2 新疆KS感染HHV-8的K1亚型和K15等位基因型
  • 3 HHV-8的K1氨基酸序列差异性
  • 4 HHV-8的不同亚型和等位基因型与新疆KS临床类型和临床损害的相关性分析
  • 5 小结
  • 结论
  • 参考文献
  • 文献综述
  • 附录1
  • 附录2
  • 附录3
  • 作者简历
  • 在学期间主要参与的研究项目
  • 在学期间发表的文章
  • 致谢
  • 导师评阅表

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