血液HCV筛查策略的探讨

论文摘要

中国丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）感染人数约达4000万，其中约50%携带病毒，为全球之最，输血传播仍是HCV感染的重要途径之一。HCV血液筛查检测是防控HCV输血传播的最显现成效的手段之一。因此，分析献血人群流行病学特点和实施有效的HCV血液筛查策略是保障血液安全的重要任务。目前基于不同检测目的且发展较为成熟的HCV筛查技术有很多。其中抗HCV ELISA检测方法是对HCV感染应用于血液筛查中最主要、最常见的实验方法，可有效阻断输血传播HCV，但因HCV感染窗口期较长可造成漏检，而核酸检测虽对窗口期标本有显著的检测优势，但检测费用昂贵、实验要求高，限制了其推广使用。抗原抗体联合试剂可同时检测HCV抗体和抗原，具有较好的灵敏度和特异性[2]，且具有操作简单、检测时间较短、实验室环境要求不高、检测费用相对核酸检测低,且与现行的HCV-Ab EIA血液筛查系统相兼容等特点。本文通过分析比较HCV抗体试剂，抗原抗体联合试剂与抗体试剂在血液筛查中的应用价值，意在探索一种经济有效的血液安全筛查策略。第一部分为北京地区无偿献血人群HCV感染及流行病学调查，对献血者进行常规抗HCV ELISA检测筛选，根据HCV5`-UTR的保守序列设计引物进行逆转录和巢式PCR扩增，并对RNA阳性标本进行基因分型测序分析。本次调查中北京地区无偿献血人群抗HCV血清学阳性率为0.35%，其中HCV核酸阳性率为0.10%，85％以上是第一次献血；北京地区的无偿献血人群中HCV感染的基因型分布仍以1b和2a为主，分别为63.56%、20.15%；3a基因型4.65%，3a/3b混合基因型为6.98%，3b基因型为0.78%，6a/1b混合型占3.88%。3b基因型的存在提示注射吸毒人群这一高危人群已经成为输血传播风险的危险来源之一，提示需要进一步流行病学的调查明确献血人群特点；6a基因型提示现在基因型分布的南北差异越来越小，这可能与近年来北京流动人口比例大幅增加有关。第二部分为抗HCV-ELISA检测方法在血液筛查中的应用，采用Ortho、WT和Murex三种抗HCV-ELISA试剂对987份血液筛查中HCV抗体初筛阳性和灰区标本进行平行检测，并进行了RIBA检测和RNA检测等补充实验，分析抗体试剂检测结果的ROC曲线，两两比较3种试剂的检测结果符合性及检出情况。Ortho、 Murex在对阳性确认标本的检出中有较好的检出率，WT相对进口试剂的检出率较低。除NS4片段外，进口试剂和国产试剂对C、NS3、NS5片段检测结果的差异均有显著性，尤其是NS3片段，血站可根据不同抗-HCV试剂对HCV不同区段抗体的检出特性合理选择初复检试剂。ROC曲线分析结果显示：单试剂检测确认标本约登指数（平均值：0.66）要显著低于两种不同试剂组合检测（平均值：0.90），双试剂对HCV的检出要高于单试剂，单试剂检测存在漏检。漏检标本中42例为RNA+/RIBA-或RNA+/RIBA IND，提示血清阳转前窗口期或HCV低滴度为ELISA漏检的重要因素之一。第三部分为第四代Murex HCV Ag/Ab联合检测试剂及HCV EIA抗体试剂联合检测在血液筛查中的应用。采用Murex HCV Ag/Ab联合检测试剂与Murex HCV Ab检测试剂，对987份血液筛查中HCV抗体初筛阳性和灰区标本，以及1份确认窗口期标本进行比较检测，用RIBA、病毒核酸检测试剂进行补充验证实验，用阳性检出率、阴性检出率和总检出率，阳性符合率、阴性符合率和总符合率对结果进行统计学分析；并进一步将Murex HCV Ag/Ab联合检测试剂分别与初筛试剂（ORTHO、WT）组合，分析ROC曲线，比较抗原抗体试剂和抗体试剂联合检测的漏检率和假阳性率，均有统计学意义，且其约登指数（0.92）略高于抗体试剂的组合（0.90）；其中，Murex HCV Ag/Ab和Murex HCV Ab两种试剂检出不一致的标本共有123份,其中5例RIBA-/RNA+标本（包括确认窗口期标本），Murex HCV Ag/Ab检出4例,Murex HCVAb试剂检出1例；15例RIBA+/RNA-标本，Murex HCV Ag/Ab检出5例,Murex HCVAb试剂检出10例。Murex HCV Ag/Ab联合检测试剂对HCV RIBA-/RNA+标本有较好的检出，与已在血液筛查中广泛应用的MurexHCV Ab试剂相比符合率不高；无论Murex HCV Ag/Ab联合检测试剂还是Murex/Ortho/WTHCVAb试剂，均存在抗体检测的漏检可能。联合使用不同的酶免HCV试剂进行血液HCV两遍检测，尤其是采用HCV Ag/Ab联合检测试剂与抗体试剂组合应用，可以最大限度的防止经血HCV的传播。通过分析血液筛查检测实验造成的漏检和假阳性问题的存在，均提示我们不能依靠单一的HCV血液筛查检测结果来决定血液的去向，应尽快建立完善的血液检测标准、明确筛查和确认实验的性能及结果的意义，以防止漏检带来的血液安全隐患和假阳性给献血者带来的伤害，从而为进一步开展对献血者的回访评估和重复献血者的选择打下基础。

论文目录

• 英文缩略词
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一章 北京地区无偿献血人群 HCV 感染及流行病学调查
• HCV 流行病学基础
• 材料与方法
• 统计学处理
• 结果
• 讨论
• 第二章 抗 HCV-ELISA 检测方法在血液筛查中的应用
• 材料与方法
• 统计学处理
• 结果
• 讨论
• 第三章 第四代 Murex HCV Ag/Ab 联合检测试剂及 HCV EIA 抗体试剂联合检测在血液筛查中的应用
• 材料与方法
• 统计学处理
• 结果
• 讨论
• 结论与展望
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历
• 文献综述
• 参考文献
• 已发表论文