组织蛋白酶新型天然药物抑制剂 ——淫羊藿黄酮类化合物的分离及抑制效应检测

论文摘要

组织蛋白酶K（Cathepsin K）对骨吸收起着重要的调节作用,是整个溶骨过程中最为重要的一种酶,其与骨质疏松症等骨质减少性疾病密切相关,已成为研究、防治骨相关疾病的新的靶标蛋白酶。通过对组织蛋白酶天然中药抑制剂单一组分的筛选,将Cathepsin K这一新的药物靶点与我国传统中药建立了联系,既能为很多相关的、尚未明确的中药作用机理提供分子水平的解释,又有可能为骨质疏松等重要疾病的治疗提供新的契机。基于以上研究背景,本论文进行了以下两部分的工作:第一部分,淫羊藿中黄酮类化合物的分离和提取。通过萃取,多次柱层析分离等方法从淫羊藿的粗提物中分离并鉴定了Icariin和Sempervirenoside A两种黄酮类化合物,为下一步的工作打下了基础。第二部分,分别测试了Icariin等七种淫羊藿中的黄酮类化合物对Cathepsin K、B、S、L的半数抑制浓度（IC50）,通过比较发现这几种黄酮类化合物均对Cathepsin K表现出了较好的抑制选择性,它们的IC50都在微摩级（Icarin最好,IC50值为46μM）。由于淫羊藿的主体成分在体内主要是以IcarisideⅡ的形式被吸收及代谢,故此本文还对IcarisideⅡ对酶的抑制开展了进一步的抑制动力学研究,结果表明IcarisideⅡ对Cathepsin K的抑制常数Ki= 10μM,其抑制类型为竞争—非竞争类混合抑制。这些结果为解决目前还有争议的淫羊藿作为骨科中药的作用机理提供了新的、分子水平的依据和线索,并为进一步研究其结构-功能关系奠定了基础。

论文目录

• 提要
• 第一章 绪论
• 1.1 组织蛋白酶
• 1.1.1 组织蛋白酶的结构
• 1.1.2 组织蛋白酶的生理功能
• 1.1.3 组织蛋白酶与病理过程的关系
• 1.1.4 组织蛋白酶的抑制剂
• 1.2 骨质疏松
• 1.2.1 骨质疏松的病理
• 1.2.2 骨质疏松的危害
• 1.2.3 骨质疏松的治疗
• 1.3 淫羊藿
• 1.3.1 淫羊藿的药理作用
• 参考文献
• 第二章 淫羊藿黄酮类化合物的分离和鉴定
• 2.1 引言
• 2.2 实验部分
• 2.2.1 样品与仪器
• 2.2.2 实验过程
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 Icariin 的鉴定
• 2.3.2 Sempervirenoside A 的鉴定
• 2.4 本章小结
• 参考文献
• 第三章 淫羊藿黄酮类提取物对组织蛋白酶的抑制效应检测
• 3.1 引言
• 3.2 实验部分
• 3.2.1 样品与仪器
• 3.2.2 实验原理及过程
• 3.3 结果与讨论
• 50)的测试'>3.3.1 淫羊藿提取物对组织蛋白酶的半数抑制浓度(IC₅₀)的测试
• 3.3.2 IcarisideⅡ对组织蛋白酶K 的抑制动力学初步研究
• 3.4 本章小结
• 参考文献
• 摘要
• ABSTRACT
• 导师简介
• 作者简介
• 致谢