论文题目: 不同猪种免疫功能及免疫相关基因表达差异研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 临床兽医学
作者: 马小军
导师: 刘宗平,王立贤
关键词: 免疫指标,血液,脾脏,电子克隆
文献来源: 甘肃农业大学
发表年度: 2005
论文摘要: 本研究以我国培育品种中畜黑猪和大白猪为研究对象,对其白细胞总数、血清IgG、IL-12、IFN-γ浓度、中性粒细胞NBT还原力等免疫指标进行比较;采用DDRT-PCR技术对血液、脾脏组织基因差异表达进行研究;并对部分差异表达序列进行了电子延伸和RT-PCR验证。其目的在于阐明中外不同猪种抗病力不同的免疫学机理和分子基础,为进一步研究差异表达基因功能奠定基础。研究结果如下:1.中畜黑猪血清IgG、IL-12、IFN-γ水平显著高于大白猪(P<0.05或P<0.01);白细胞总数、中性粒细胞NBT还原力、外周血液单核细胞培养上清的IgG、IL-12等指标品种间差异不显著。2.大白猪180日龄重与中畜黑猪差异显著(P<0.05),出生重、断奶重、下网重及180日龄背膘厚等生产性能指标则无显著性差异。3.对免疫指标间相关性进行分析发现:血液IgG浓度与白细胞总数、外周血单个核细胞培养上清IFN-γ相关性较低(r=0.157,0.191),与血清、外周血单个核细胞培养上清IL-12浓度及血清IFN-γ成负相关(r=-0.305,-0.267,-0.242);中性粒细胞NBT还原力与血清IL-12、IFN-γ浓度正相关(r=0.481,0.515);血清IL-12、IFN-γ间存在正相关关系(r=0.643)。4.对免疫指标与生产性能指标相关性分析得知,血清IgG浓度与下网重正相关(r=0.251),而与180日龄体重成负相关(r=-0.157);中性粒细胞NBT还原力与180日龄体重成负相关(r=-0.256);白细胞总数与出生重、断奶重正相关(r=0.291,0.263),而与下网重、180日龄体重及背膘厚负相关(r=-0.192,-0.333);血清IL-12、IFN-γ浓度和断奶重、下网重及180日龄体重负相关(r=-0.108/-0.296;-0.401/-0.607;-0.242/-0.473),与出生重和180日龄背膘厚正相关(r=0.131/0.276;0.130/0.280)。5.利用DDRT-PCR技术从中畜黑猪和大白猪血液分离得到56条差异表达片段,其中17条反Norherning杂交验证为阳性。5条在中畜黑猪血液特异性表达, 4条在中畜黑猪表达水平高于大白猪,7条在大白猪血液特异性表达, 1条在大白猪血液表达水平高于中畜黑猪。对阳性片段进
论文目录:
摘要
Summary
缩略词一览表
第一章 文献综述
1. 猪抗病育种研究进展
1.1 免疫应答与猪抗病育种
1.2 猪抗病相关基因研究概况
2. 研究基因表达方法概述
2.1 差别筛选技术
2.2 扣除杂交
2.3 mRNA 差异显示技术
2.4 代表性差异分析
2.5 抑制性消减杂交技术
2.6 基因表达系列分析
2.7 基因芯片
2.8 表达序列标签串联排列连接
2.9 GeneCalling
3. 全长cDNA 克隆的方法
3.1 cDNA 文库筛选
3.2 cDNA 末端快速扩增
3.3 反向 PCR(inverse PCR)
3.4 电子克隆
4. 立题依据和研究内容
第二章 不同品种猪免疫指标、生产性能的测定比较
前言
1 材料与方法
1.1 实验动物
1.2 样品采集
1.3 主要仪器和试剂
1.4 实验方法
2 结果与分析
2.1 不同品种猪免疫指标测定结果及其相关分析
2.2 不同品种猪部分生产性能测定及其相关分析
2.3 免疫指标与生产性能相关性分析
2.4 不同品种猪发病情况记录
3 讨论与结论
3.1 免疫指标
3.1.1 白细胞总数
3.1.2 中性粒细胞NBT 还原力
3.1.3 血清IgG 含量
3.1.4 细胞因子
3.1.4.1 白细胞介素12
3.1.4.2 γ干扰素
3.2 生产性能
3.3 免疫指标与生产性能的关系
3.4 展望
第三章 不同品种猪血液、脾脏差异显示研究
前言
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 试验动物
1.1.2 样品采集
1.1.3 主要仪器设备
1.1.4 常规试剂及试剂盒
1.1.5 引物
1.1.6 聚丙烯凝胶电泳及硝酸银染色
1.1.7 差异片段的反Northern 杂交鉴定
1.1.8 差异片段克隆
1.2 方法
1.2.1 总RNA 提取
1.2.2 总RNA 纯化、检测及RNA 池组建
1.2.3 反转录
1.2.4 DDRT-PCR
1.2.5 8%非变性聚丙烯凝胶电泳及硝酸银染色
1.2.6 差异条带回收
1.2.7 差异片段的二次PCR 扩增
1.2.8 差异表达条带的反Northern 杂交验证
1.2.9 反Northern 杂交验证为阳性的差异表达条带的回收
1.2.10 连接载体
1.2.11 转化
1.2.12 重组质粒鉴定
1.2.13 测序
1.2.14 序列比对分析
2 结果与分析
2.1 总 RNA 提取
2.2 总 RNA 纯化
2.3 mRNA 差异显示结果
2.4 差异条带的二次 PCR 扩增
2.5 差异表达片断的反 Northern 点杂交验证
2.6 差异片断克隆及其重组质粒鉴定
2.7 差异表达片段序列比对分析
3 讨论
3.1 关于 DDRT-PCR
3.2 差异表达基因功能分析
3.2.1 18S核糖体RNA
3.2.2 Slingshot2
3.2.3 微管肌动蛋白交联因子
3.2.4 CC 趋化性细胞因子受体基因
3.2.5 亮氨酸氨基肽酶
3.2.6 MHCⅠ
3.2.7 上皮膜蛋白2
第四章 差异表达 EST 生物信息学研究
前言
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.2 试验方法
2 结果
2.1 比对结果及 Unigene 编号获得
2.2 利用 DNAMAN 软件进行序列拼接
2.3 拼接序列 ORF 分析
2.4 引物设计
2.5 RT-PCR 验证
2.6 重组质粒菌体 PCR 鉴定
2.7 扩增序列与电子延伸序列相似性比较分析
3 讨论
3.1 关于生物信息学
3.2 电子克隆
3.3 生物学软件
3.4 展望
第五章 结论
致谢
参考文献
附录一
附录二
个人简历
导师简介
发布时间: 2007-03-12
参考文献
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