农杆菌介导甜菜转化体系的优化

论文摘要

甜菜病害是导致产量和含糖量下降的重要原因之一,通过基因工程手段获得抗病品种是解决途径之一。本研究以甜菜无菌苗的叶柄为外植体材料,通过农杆菌介导将玉米胚乳核糖体失活蛋白基因（cRIP）转入甜菜体内,对农杆菌转化条件和方法进行较为系统地比较研究,发现对甜菜叶柄进行 2 天的预培养后用菌液浓度 OD600=0.3-0.4的农杆菌感染 8-10min,在加入 200 ug/L 乙酰丁香酮（AS）的共培养基中共培养 2-3天,脱菌处理后接入卡那霉素浓度为 100mg/L、头孢霉素浓度为 500 mg/L 的选择培养基中进行筛选,获得的抗性芽较多,抗性芽分化频率可达到 36.0%。本项研究初步建立了一种转化频率高、稳定性好、通用性较强的甜菜遗传转化技术体系,从而通过植物转基因技术为选育高产、优质、广谱抗病的甜菜品种奠定基础。

论文目录

• 1 引言
• 1.1 植物转基因研究概况
• 1.2 甜菜基因工程研究进展
• 1.2.1 甜菜转基因研究
• 1.2.2 甜菜遗传转化方法的研究
• 1.3 核糖体失活蛋白（RIP）在植物抗病基因工程中的应用
• 1.4 本研究的目的和意义
• 2 材料和方法
• 2.1 供试材料
• 2.2 工程菌株
• 2.3 根癌农杆菌培养
• 2.4 外植体的制备
• 2.5 转化方法
• 2.6 培养基
• 2.7 检测
• 2.7.1 根癌农杆菌质粒DNA 的提取
• 2.7.2 聚合酶链式反应（PCR）检测目的基因
• 2.7.3 抗性芽的PCR 检测
• 3 结果与分析
• 3.1 卡那霉素浓度对不定芽分化频率的影响
• 3.2 预培养对不定芽分化频率的影响
• 3.3 农杆菌感染浓度和感染时间对不定芽分化频率的影响
• 3.4 共培养时间对不定芽分化的影响
• 3.5 头孢霉素对不定芽分化频率的影响
• 3.6 乙酰丁香酮对不定芽转化的影响
• 3.7 对感染方法的改进
• 3.8 PCR 检测
• 4 结论与讨论
• 致谢
• 参考文献
• 作者简介