八种蕈菌提取物体外抗癌活性评价及SLPE诱导BGC-823细胞凋亡的研究

论文摘要

目的：对8种蕈菌（红汁乳菇Lactarius hatsudake、马鞍菌Helvella elastica、绒边乳菇Lactarius pubescens、绒毛栓菌Trametes pubescens、柠檬黄蜡伞Hygrophorus lucorum、绣球菌Sparassis crispa、血红铆钉菇Chroogomphis rutilus、褐环粘盖牛肝菌Suillus luteus）的石油醚、乙酸乙酯、乙醇提取物和多糖相的体外抗肿瘤活性进行评价,筛选出抗肿瘤活性最强的组分；对活性较强组分的抗肿瘤机制进行研究,为抗肿瘤药物的研发提供科学依据。方法：1、采用四氮唑盐酶还原法（MTT）评价8种蕈菌的石油醚、乙酸乙酯、乙醇提取物以及多糖相的体外抗肿瘤活性,计算各提取物的半数抑制浓度IC5o值,比较各提取物的抗肿瘤活性。2、对抗肿瘤活性较强的提取物SLPE（褐环粘盖牛肝菌石油醚提取物）,采用MTT法测定其对K562（人慢性骨髓性白血病细胞株）、H446（人小细胞肺癌细胞株）、BGC-823（人胃癌细胞株）、SMMC-7721（人肝癌细胞株）、HeLa（人宫颈癌细胞株）的体外抗肿瘤活性。用倒置显微镜观察不同细胞株在SLPE处理48h后的细胞形态变化。3、采用MTT法检测不同剂量SLPE对BGC-823细胞处理不同时间的抑制作用。采用Hoechst33258荧光染色法观察BGC-823细胞凋亡时的形态变化,琼脂糖凝胶电泳检测BGC-823细胞凋亡的DNA梯状带,流式细胞仪检测SLPE对BGC-823细胞凋亡率及细胞周期分布的影响。结果：1、8种蕈菌的有机溶剂提取物在体外对BGC-823细胞的增殖均具不同程度的抑制作用,其中,有6种提取物的IC50<100μg/mL,分别为：红汁乳菇、马鞍菌、绒边乳菇的乙酸乙酯提取物和褐环粘盖牛肝菌的3种有机溶剂提取物。褐环粘盖牛肝菌石油醚提取物（SLPE）的抑制作用最强,IC50值为19.26μg/mL。2、SLPE在体外对所试的5种肿瘤细胞株（K562,H446, BGC-823, SMMC-7721, HeLa）的增殖均有不同程度的抑制作用,ICso值范围为3.66-81.28μg/ml倒置显微镜下观察发现,经SLPE处理48 h后,各肿瘤细胞株体积变小,变圆,折光性降低,细胞膜皱缩起泡。SLPE具较广泛的抗肿瘤谱。3、SLPE对BGC-823细胞的增殖抑制作用呈明显的剂量-效应关系和时间-效应关系。Hoechst33258荧光染色显示,经SLPE处理48 h后的BGC-823细胞呈现典型的凋亡细胞的特征,染色质致密浓染,细胞核碎裂,形成凋亡小体。琼脂糖凝胶电泳检测表明,SLPE处理后的细胞,DNA出现凋亡梯状带。流式细胞仪检测发现,经80μg/mL SLPE处理48 h后的BGC-823细胞,凋亡率为25.67%。细胞周期分布表明：经各浓度SLPE处理后的BGC-823细胞与对照组比较,处于S期的细胞百分比上升,细胞周期阻滞于S期。SLPE可诱导BGC-823细胞凋亡结论：1、八种蕈菌各提取物中,褐环粘盖牛肝菌石油醚提取物的体外抗肿瘤活性最强。2、SLPE具较广的抗肿瘤谱。3、SLPE对BGC-823细胞增殖的抑制作用,呈现量效和时效关系,可诱导BGC-823细胞凋亡,使其细胞周期阻滞于S期。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 文献综述
• 1 高等真菌代谢产物抗肿瘤研究概况
• 1.1 多糖
• 1.2 蛋白质和多肽类
• 1.3 萜类
• 1.4 甾类
• 1.5 其它
• 2 八种高等真菌的研究概况
• 2.1 褐环粘盖牛肝菌的研究概况
• 2.2 红汁乳菇的研究概况
• 2.3 马鞍菌的研究概况
• 2.4 绒边乳菇的研究概况
• 2.5 绒毛栓菌的研究概况
• 2.6 柠檬黄蜡伞的研究概况
• 2.7 绣球菌的研究概况
• 2.8 血红铆钉菇的研究概况
• 第一章 八种蕈菌体外抗肿瘤活性评价
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 1.3 数据处理
• 2 结果与分析
• 2.1 八种子实体石油醚提取物体外抗肿瘤活性评价
• 2.2 八种子实体乙酸乙酯提取物体外抗肿瘤活性评价
• 2.3 八种子实体乙醇提取物体外抗肿瘤活性评价
• 2.4 八种子实体多糖体外抗肿瘤活性评价
• 2.5 八种子实体各提取物体外抗肿瘤活性比较
• 3 讨论
• 第二章 SLPE对不同肿瘤细胞株的增殖抑制作用
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 1.3 数据处理
• 2 结果与分析
• 2.1 SLPE对不同肿瘤细胞株的增殖抑制作用
• 2.2 SLPE对不同肿瘤细胞株形态的影响
• 3 讨论
• 第三章 SLPE诱导人胃癌BGC823细胞凋亡的研究
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 1.3 数据处理
• 2 结果与分析
• 2.1 SLPE对BGC823人胃癌细胞的时间浓度效应
• 2.2 Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡
• 2.3 DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡
• 2.4 流式细胞术检测细胞凋亡
• 2.5 流式细胞术检测细胞周期分布
• 3 讨论
• 实验主要结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 攻读学位期间参与的课题及科研成果