人颗粒溶素的克隆表达、抗体制备及其临床应用

人颗粒溶素的克隆表达、抗体制备及其临床应用

论文摘要

为了获得具有生物活性的GNLY蛋白质,并探讨其与某些临床疾病的相关性,本研究构建了重组原核表达质粒pE728a(+)-GNLY,在大肠杆菌中诱导表达出GNLY蛋白,并获得纯化的GNLY;经Westen blot证实GNLY具有免疫原性;MTT鉴定GNLY具有杀伤肿瘤细胞的生物学活性。用GNLY免疫兔制备了高效价的抗人GNLY多克隆抗体;以初步建立的ELISA方法定量检测人血清中GNLY含量;结果表明原发性肝癌患者组的GNLY血清水平低于正常对照组(P<0.05),乙肝病毒感染急性期患者组的GNLY血清水平显著高于正常对照组(P<0.01)。以建立的实时荧光定量PCR方法对人PBMC中GNLY的mRNA表达水平进行定量检测,结果表明原发性肝癌患者组PBMC中GNLY的mRNA水平低于正常对照组(P<0.05),乙肝病毒感染急性期患者组PBMC中GNLY的mRNA水平显著高于正常对照组(P<0.01)。

论文目录

  • 英文缩写中英文对照表
  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 前言
  • 技术路线
  • 第一部分 人GNLY重组原核表达质粒的构建
  • 第二部分 人GNLY融合蛋白的表达、鉴定与纯化
  • 第三部分 抗人GNLY多克隆抗体的制备、鉴定及临床应用
  • 第四部分 GNLY荧光定量PCR方法的建立及临床应用
  • 小结
  • 参考文献
  • 综述: 颗粒溶素研究进展
  • 致谢
  • 附录
  • 相关论文文献

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