靶向线粒体肽对碘造影剂致高胆固醇血症大鼠急性肾损伤的保护作用

论文摘要

背景：造影剂急性肾损伤（Contrast media-induced acute kidney injury,CIAKI）已成为当前院内发生急性肾损伤（Acute kidney injury,AKI）的第三位常见原因,研究表明氧化应激在CIAKI中起重要作用,NADPH氧化酶是产生活性氧的主要来源；靶向线粒体肽能清除细胞内活性氧,减少细胞线粒体ROS产生,抑制脂质过氧化；然而NADPH氧化酶及靶向线粒体肽在CIAKI中的作用未见文献报道。目的：研究氧化应激、NADPH氧化酶和线粒体能量代谢在高胆固醇血症大鼠CIAKI中的作用；探讨靶向线粒体肽（MTP131,SPI20）对高胆固醇血症大鼠CIAKI的保护作用及机制。方法：40只雄性SD大鼠随机分为先将大鼠随机分为两组：正常饮食组8只（NN组）,高胆固醇饮食组32只（H组,4%胆固醇和1%胆酸钠）。正常组大鼠因低体重死亡一只,高胆固醇饮食组死亡四只,继续高胆固醇饮食的大鼠随机分为4组,每组7只,分别为高胆固醇饮食组（HN组）、高胆固醇饮食+造影剂组（HH组）、高胆固醇饮食+造影剂+MTP131（HM组）、高胆固醇饮食+造影剂+SPI20（HS组）。NN组和HN组大鼠分别从尾静脉注射等量生理盐水10ml/kg,HH组、HM组和HS组大鼠从尾静脉注射（76%泛影葡胺）造影剂,注射剂量均为10ml/kg,建立高胆固醇血症大鼠造影剂急性肾损伤模型。HM组和HS组大鼠在注射造影剂前24 h和30min及注射造影剂后24h分别经腹腔注射MTP131和SPI20（每次3 mg/kg）。注射造影剂前和后48 h收集尿标本,经眼球取血,检测尿肌酐、尿钾、尿钠和血清肌酐、血钾、血钠、血胆固醇、血甘油三酯。注射造影剂后48 h,采用10%水合氯醛（3mL/kg）腹腔注射麻醉后处死大鼠,取左肾制备肾组织匀浆,分别用于测脂质过氧化产物丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和ATP酶活性；取右肾下极组织采用10%福尔马林固定,石蜡包埋、切片,HE染色,观察肾脏的病理改变；其余部分装入冻存管中,保存于液氮中用于提取组织蛋白检测肾组织NADPH氧化酶活性及Western blot检测肾组织NOX4表达。结果：注射造影剂前,与NN组比较各组大鼠血胆固醇水平显著增高（P<0.01）,各组大鼠体重、血清肌酐、血甘油三酯、内生肌酐清除率、钾钠排泄分数差异均无统计学意义。注射造影剂后48h,与NN组比较,HN组大鼠血清肌酐、肾小管损伤分数和肾组织NADPH氧化酶活性增高（P值分别P<0.05,P<0.001,P<0.001）；HH组大鼠血清肌酐、钾钠排泄分数、肾组织匀浆MDA含量明显升高（P<0.01）,肾小管损伤分数和肾组织NADPH氧化酶活性显著增高（P<0.001）,内生肌酐清除率、肾组织匀浆SOD和ATP酶活性显著下降（P<0.01）,肾组织NOX4蛋白表达明显上调（P<0.05）。与HN组比较,HH组大鼠血清肌酐、钾钠排泄分数、肾组织匀浆MDA含量、肾小管损伤分数、肾组织NADPH氧化酶活性明显升高（P<0.01）,内生肌酐清除率、肾组织匀浆SOD和ATP酶活性下降（P<0.05）,肾组织NOX4蛋白表达上调（P<0.05）。与模型组比较,MTP131和SPI20干预组大鼠血清肌酐、钾钠排泄分数、肾脏组织匀浆MDA含量显著降低（P<0.05）,肾组织匀浆SOD和ATP酶活性显著升高（P<0.05）,肾小管损伤分数明显减少（P<0.001）,肾组织NADPH氧化酶活性及NOX4蛋白表达下调（P值分别P<0.001,P<0.05）。结论：氧化应激、NADPH氧化酶和线粒体能量代谢在高胆固醇血症大鼠CIAKI中起重要作用；靶向线粒体肽MTP131和SPI20对高胆固醇血症大鼠CIAKI有保护作用,其机理可能与抗氧化、清除脂质过氧化物,降低肾组织NADPH氧化酶活性,下调肾组织NOX4表达及保护线粒体ATP酶有关。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一章 前言
• 第二章 材料和方法
• 1.材料
• 2.方法
• 第三章 结果
• 3.1 各组大鼠造影前体重及血尿生化指标的变化
• 3.2 各组大鼠注射造影剂后48h血尿生化指标的变化
• 3.3 各组大鼠肾组织匀浆氧化指标及ATP酶活性的变化
• 3.4 各组大鼠肾组织病理学检查及肾小管损伤半定量评分
• 3.5 检测各组大鼠肾组织NADPH氧化酶
• 附图
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢