降胆固醇益生乳杆菌的筛选及其降胆固醇作用的研究

论文摘要

对采自我国新疆和蒙古国不同地区传统发酵乳制品（以酸马奶为主）中的61株乳杆菌进行了耐胃酸、耐胆盐及降胆固醇能力等潜在益生特性的研究,同时利用16S rDNA序列同源性分析的方法对部分益生特性好的菌株的鉴定结果进行了验证,并对这些菌株是否具有胆盐水解酶活性进行了定性及定量检测;通过体外试验筛选出对胆固醇有不同吸收、吸附作用及具有不同胆盐水解酶活性的九株乳杆菌,灌胃给高脂血症大鼠,观察它们对血脂的影响,为系统地了解乳酸菌降胆固醇的作用机理和体内外相关性提供了基础数据,也为进一步开发和利用传统发酵乳制品中的乳酸菌资源奠定了基础。通过对蒙古国及我国新疆牧区酸马奶等传统发酵乳制品中的降胆固醇益生乳杆菌的筛选及对其降胆固醇体内外相关性的研究,得出以下结论:在61株乳杆菌中有12株耐酸性、耐胆盐、粘附性及降胆固醇能力较好菌株;生长菌株对培养基中胆固醇的移除率依赖于其在含0.3%胆盐培养基中的生长情况,二者存在显著正相关性（P<0.01）。有3株菌的休眠菌株对胆固醇的移除率高于其生长菌株的,表明它们对胆固醇有较强的吸附能力。利用16S rDNA同源性分析的方法对13株乳杆菌进行了鉴定,其中有10株与传统生理生化方法鉴定的结果一致;另三株菌通过进一步的分析,确认符合16S rDNA同源性分析鉴定的结果。对12株具有较好益生特性的乳杆菌的胆盐水解酶活性进行了定性筛选和定量测定,有4株菌具有胆盐水解酶活性,通过乳酸菌在体外降胆固醇的试验,发现胆盐水解酶活性与菌体洗涤液中胆固醇含量呈极显著的正相关性（P<0.01）。将体外筛选出的九株对胆固醇有不同吸收、吸附作用及具有不同胆盐水解酶活性的菌株灌胃高脂血症大鼠,观察其体内外降胆固醇的相关性,发现灌胃乳杆菌组对大鼠血脂都有一定程度的降低作用,但菌株间差异显著（P<0.05）。在体外对胆固醇吸收或吸附能力强的菌株,在动物体内降胆固醇功能明显。灌胃含有胆盐水解酶活性的乳酸菌菌株,其粪便中游离胆酸含量高于模型组,随着菌株胆盐水解酶活性的减少粪便中游离胆酸含量依次降低,但对降血脂作用较弱。通过对试验大鼠的肝脏大体形态及肝脏、心血管组织切片的观察,发现在所有菌株中LIP-1的肝脏及心血管组织状态最接近正常对照组。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 1.1 胆固醇与人体健康
• 1.1.1 胆固醇简介
• 1.1.2 胆固醇的生理功能
• 1.1.3 人体的胆固醇合成与代谢
• 1.1.4 人体中胆固醇的自身调节
• 1.1.5 高胆固醇血症对人体的危害
• 1.1.6 高胆固醇血症的防治对策
• 1.2 益生菌的研究现状
• 1.2.1 益生菌的来源及种类
• 1.2.2 益生菌的选择标准
• 1.2.3 益生菌的生理功能
• 1.3 益生乳酸菌降胆固醇的研究
• 1.3.1 乳酸菌降胆固醇作用机制的研究
• 1.4 本课题研究的目的与意义
• 1.4.1 益生菌资源的开发
• 1.4.2 降胆固醇机理的研究
• 1.5 本课题主要研究内容
• 2 发酵乳制品中降胆固醇益生乳杆菌的体外筛选
• 2.1 材料和方法
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 实验方法
• 2.2 乳杆菌益生特性的研究结果与分析
• 2.2.1 乳杆菌耐受pH3.0 人工胃液及不同浓度胆盐的筛选结果
• 2.2.2 乳杆菌疏水性能力及生长菌株、休眠菌株降胆固醇能力的测定结果
• 2.2.3 菌株对胆固醇的移除率与 0.3%胆盐耐受性相关性的研究
• 2.2.4 生长菌株对胆固醇的移除率与疏水性相关性的研究
• 2.2.5 休眠菌株对胆固醇的移除率与疏水性相关性的研究
• 2.3 讨论
• 2.4 小结
• 3 酸马奶中乳杆菌16S rDNA序列同源性分析
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 试验材料
• 3.1.2 试验方法
• 3.2 16S rDNA 序列同源性分析结果
• 3.2.1 16S rDNA 扩增、克隆及测序
• 3.2.2 16S rDNA 同源性分析及系统发育树的建立
• 3.2.3 结果与分析
• 3.3 讨论
• 3.4 小结
• 4 乳酸菌胆盐水解酶活性与其降胆固醇相关性的研究
• 4.1 材料和方法
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 实验方法
• 4.2 结果与分析
• 4.2.1 胆盐水解酶活性的定性检测结果
• 4.2.2 胆盐水解酶活性的定量检测结果
• 4.2.3 胆固醇的测定结果与分析
• 4.2.4 胆盐水解酶活性及其降胆固醇能力的相关性分析结果
• 4.2.5 影响胆盐水解酶活力因素的研究
• 4.3 讨论
• 4.4 小结
• 5 乳酸菌降胆固醇体内相关性的研究
• 5.1 材料与方法
• 5.1.1 材料
• 5.1.2 实验方法
• 5.2 结果与分析
• 5.2.1 灌胃菌体对大鼠摄食量和饲料利用率及脏器指数的影响
• 5.2.2 灌胃菌体对高脂血症大鼠血脂的影响
• 5.2.3 灌胃菌体对高脂血症大鼠肝脏与粪便胆固醇含量的影响
• 5.2.4 灌胃菌体对高脂血症大鼠粪便中胆酸含量的影响
• 5.2.5 对肝脏大体形态及肝脏、心血管组织切片的观察
• 5.3 讨论
• 5.4 小结
• 6 总体讨论与结论
• 6.1 总体讨论
• 6.2 结论
• 致谢
• 参考文献
• 作者简介