ERK信号通路介导姜黄素治疗人脑胶质瘤细胞株U251的实验研究

论文摘要

目的:探讨姜黄素对体内外人脑胶质瘤细胞株U251的增殖、分化、侵袭、血管生成等四方面的影响,以及ERK信号通路通过调节其下游信号分子c-fos、MMP-9、GFAP和Ets-1的表达参与姜黄素治疗胶质瘤的机制。方法:1用姜黄素治疗体外U251细胞,MTT法检测增殖能力变化;平板克隆形成实验检测克隆形成能力变化;倒置显微镜观察形态改变;流式细胞仪检测细胞周期变化;Transwell侵袭小室模型法检测侵袭能力变化;免疫细胞化学法或Western blot法检测PCNA、c-fos、GFAP、vimentin、MMP-9、VEGF、Ets-1、ERK、pERK等蛋白表达变化。2用PD98059治疗体外U251细胞,MTT法检测增殖能力变化;免疫细胞化学法或Western blot法检测c-fos、GFAP、MMP-9、Ets-1、ERK、pERK等蛋白表达变化。3皮下注射法建立裸鼠皮下移植胶质瘤模型并鉴定;观察姜黄素腹腔注射后移植瘤体积和重量变化, Western blot法检测ERK、pERK等蛋白表达变化。4瘤细胞悬液脑内注射法建立裸鼠颅内移植胶质瘤模型并鉴定;姜黄素腹腔注射或瘤内注射治疗移植瘤,观察移植瘤体积的变化;Western blot法检测瘤内注射后ERK、pERK等蛋白表达变化。结果:1姜黄素治疗后,U251细胞增殖率呈剂量依赖性下降,IC50等于16μmol/L;细胞克隆形成率明显降低;细胞突起增多变长,接触抑制消失;S期细胞明显减少;侵袭能力显著下降;PCNA、c-fos、vimentin、MMP-9、VEGF、Ets-1、pERK等蛋白表达显著减少,GFAP蛋白表达显著增多,ERK蛋白表达无明显改变。2 PD98059治疗后,U251细胞增殖率呈剂量依赖性下降,IC50等于25μmol/L;c-fos、MMP-9、Ets-1、pERK等蛋白表达显著减少,GFAP蛋白表达显著增多,ERK蛋白表达无明显改变。3成功建立U251细胞裸鼠皮下移植瘤模型,姜黄素腹腔注射后移植瘤体积和重量降低; pERK蛋白表达减少, ERK蛋白表达无明显改变。4成功建立U251细胞裸鼠颅内移植瘤模型,姜黄素腹腔注射后肿瘤体积无明显变化;瘤内注射给药后肿瘤体积变小, pERK蛋白表达减少,ERK蛋白表达无明显改变。结论:1姜黄素可抑制体外U251细胞增殖、侵袭和血管生成,诱导细胞分化,其机制与抑制ERK通路,继而抑制c-fos、MMP-9和Ets-1等蛋白表达及诱导GFAP蛋白表达有关。2姜黄素腹腔注射可抑制裸鼠皮下移植胶质瘤生长。抑制ERK通路是机制之一。3对颅内移植瘤,姜黄素腹腔注射无明显治疗作用,而瘤内注射有抑制移植瘤生长作用,抑制ERK通路是机制之一。

论文目录

• 主要英文缩略语
• 摘要
• Abstract
• 前言
• 参考文献
• 第一部分 体外实验研究
• 第一节 增殖抑制实验
• 前言
• 一、实验材料与仪器
• 二、实验方法
• 三、结果
• 四、讨论
• 小结
• 参考文献
• 第二节 分化诱导实验
• 前言
• 材料与仪器
• 一、实验材料与仪器
• 二、实验方法
• 三、结果
• 四、讨论
• 小结
• 参考文献
• 第三节 侵袭抑制实验
• 前言
• 一、实验材料与仪器
• 二、实验方法
• 三、结果
• 四、讨论
• 小结
• 参考文献
• 第四节 血管生成抑制实验
• 前言
• 一、实验材料与仪器
• 二、实验方法
• 三、结果
• 四、讨论
• 小结
• 参考文献
• 第五节 PD98059 治疗实验
• 前言
• 一、实验材料与仪器
• 二、实验方法
• 三、结果
• 四、讨论
• 小结
• 参考文献
• 第二部分 裸鼠皮下移植瘤抑制实验
• 第一节 皮下移植瘤模型的建立及鉴定
• 前言
• 一、实验材料与仪器
• 二、实验方法
• 三、结果
• 四、讨论
• 小结
• 参考文献
• 第二节 皮下移植瘤抑制实验
• 前言
• 一、实验材料与仪器
• 二、实验方法
• 三.结果
• 四.讨论
• 小结
• 参考文献
• 第三部分 裸鼠颅内移植瘤抑制实验
• 第一节 颅内移植瘤模型的建立和鉴定
• 前言
• 一、实验材料与仪器
• 二、实验方法
• 三、结果
• 四、讨论
• 小结
• 参考文献
• 第二节 颅内移植瘤抑制实验
• 前言
• 一、实验材料与仪器
• 二、实验方法
• 三.结果
• 四.讨论
• 小 结
• 参考文献
• 总结
• 致谢
• 综述
• 参考文献