白鲜组织培养技术及其内生真菌分离和作用的研究

论文摘要

白鲜（Dictamnus dasycarps Turcz.）为芸香科植物,多年生草本,以根皮入药,具有抗菌消炎、广谱抗真菌、抗癌、止血、提高机体免疫力等多种药用功能,是重要的皮肤科用药,同时作为护肤保健品广泛应用。主要分布在东北、华北、西南及长江流域地区。近年来,由于应用的不断扩展,新产品的不断开发,植物本身种子繁殖能力较弱的特点,导致资源日趋紧缺,这对白鲜更广泛的开发和应用将带来重要影响。为了有效地保护和利用白鲜资源,解决白鲜资源缺乏的问题,本文研究了白鲜组织培养技术,分离获得了白鲜内生真菌,并将其应用于白鲜悬浮细胞产生白鲜碱的诱导,取得以下结果:1、以茎为材料成功获得了白鲜愈伤组织,并对白鲜愈伤组织诱导培养基进行了优化,结果MS+2.4-D0.5+KT1.5+6-BA1.5（M42）和MS+2.4-D0.5+KT0.5+6-BA0.5（M52）培养基愈伤组织生长旺盛,生物量大,呈淡黄绿色,较疏松,其中M52培养基开始启动较慢,后来愈伤生长速度加快,并获得理想的愈伤组织。2、愈伤经过继代和培养条件的进一步优化,获得了可用于悬浮细胞培养的愈伤组织。以愈伤继代培养基为基础,通过改进获得了悬浮细胞培养基,培养基组成为MS+2,4-D0.5+KT1.5+BA1.5（M4-16）、MS+2,4-D0.5+KT1.5+BA1.0（M4-17）,建立了白鲜悬浮细胞培养体系。3、在白鲜愈伤诱导的同时,从10个材料中分离获得了的50个内生真菌单菌落。分别为M1-1至M1-5、M 2-1至M 2-7、M 3-1至M 3-8、M 4-1至M 4-6、M 6-1至M 6-6、M 7-1、M 7-2、M 8-1至M 8-6、M 9-1至M 9-4、M10-1至M10-6。4、以M 1-3、M 3-5、M 1-2、M 1-4、M 6-5、M 1-5、M 6-1、M 1-6等7种真菌为诱导子诱导白鲜悬浮细胞产生白鲜碱,优化了诱导条件,结果以细胞培养的末期（12 d）加入真菌诱导子,对悬浮细胞产生白鲜碱的影响最大,各诱导子对白鲜碱的产生均有明显的促进作用;所有诱导时期,均以诱导子M1-5诱导效果最为明显,M1-2和M6-1次之,M1-4最差,M6-5、M1-6和M1-3对白鲜悬浮细胞产白鲜碱的促进作用不显著。5、建立了简便的白鲜碱检测方法,在237 m处用紫外分光光度计检测白鲜碱的含量与薄层扫描法的验证检测结果差异在0.1%～0.2%之间,误差在实验允许范围内,因此可以直接应用紫外分光光度计在237 nm处检测白鲜碱的含量。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1 白鲜植物形态与中药应用
• 1.1 白鲜植物形态
• 1.2 白鲜的中药应用
• 1.3 白鲜的化学成分
• 1.4 白鲜皮的药理活性与临床应用
• 2 药用植物组织与细胞培养技术的应用
• 3 植物内生真菌的分离
• 3.1 植物内生真菌
• 3.2 植物组培材料中的菌的来源
• 3.3 植物内生菌的分离方法
• 4 真菌诱导子对植物悬浮细胞产生天然活性成分的促进作用
• 5 研究的目的与意义
• 第二章 白鲜愈伤组织的诱导与培养条件的研究
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 3 结果与分析
• 3.1 愈伤组织的诱导
• 3.2 愈伤组织的生长
• 4 讨论
• 第三章 白鲜内生真菌的分离
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 3 结果与分析
• 3.1 内生真菌的分离
• 3.2 内生真菌菌落的观察
• 4 讨论
• 5 小结
• 第四章 白鲜悬浮细胞培养体系的建立
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 3 结果与分析
• 3.1 白鲜愈伤组织继代培养基的筛选
• 3.2 液体培养基的筛选和优化
• 3.3 接种量对白鲜悬浮细胞生长的影响
• 3.4 白鲜悬浮细胞生长曲线的测定
• 3.5 培养基的优化
• 4 讨论
• 5 小结
• 第五章 白鲜内生真菌诱导白鲜悬浮细胞产生白鲜碱的方法研究
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 3 结果与分析
• 3.1 不同真菌诱导子处理对白鲜悬浮细胞产白鲜碱的影响
• 3.2 紫外分光光度法与薄层扫描法检测方法的比较
• 4 讨论
• 5 小结
• 第六章 创新点与下一步工作设想
• 1 本文创新点
• 2 下一步研究设想
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介