论文摘要
目的观察比较大鼠骨髓间质干细胞(rat mesenchymal stem cells, rMSCs)和新鲜骨髓细胞静脉移植入大脑中动脉栓塞的大鼠后在脑内存活、迁移及分化情况,以及对病灶组织结构和神经功能恢复的影响。方法提取新鲜骨髓,体外分离培养rMSCs,流式细胞术检测两月龄鼠原代、第2 代及第4 代rMSCs 表面标志及其动态变化。运用改良Zea Longa 的线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞模型,随机分为对照组、rMSCs 静脉移植组及新鲜骨髓细胞静脉移植组。模型成功后分别于术后24h 经尾静脉,对照组注射磷酸盐缓冲液(PBS)1ml,rMSCs 和新鲜骨髓细胞移植组分别注射CTO(cell tracker orange)标记的rMSCs 细胞悬液和新鲜骨髓细胞悬液1ml。各组大鼠分别于术后24h、移植后1W、2W 应用modified Neurological Severity Scores(mNSS)评分评价治疗前后的神经功能状况,应用荧光激发及免疫组化技术检测rMSCs 和新鲜骨髓细胞在脑内存活、迁移及分化情况。结果rMSCs 体外培养表现出贴壁生长和多态性的特性,培养扩增至第5 代,细胞数可达1-2×1011个。流式细胞术检测rMSCs 原代中CD34、CD45 等有阳性表达,传代后表达率接近于零;CD29、CD90 等表达呈阳性,CD29 的表达率随着细胞传代而逐渐升高,CD90 的表达率则逐渐下降。与对照组对比,rMSCs 及新鲜骨髓细胞移植组大鼠神经功能改善明显,mNSS 评分差异有统计学意义(P<0.001),而两移植组间mNSS 评分差异没有统计学意义(P>0.05)。移植后2W组织学观察,与对照组相比移植组梗塞区脑组织结构恢复较好。移植rMSCs 和新鲜骨髓细胞组在荧光激发下均可见CTO 标记的细胞在梗塞区及其周边区聚集并存活,且有部分细胞表达神经元特异性烯醇化酶(NSE)、巢蛋白(nestin)、神经丝蛋白(NF-200)及星型胶质细胞标志物神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)
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