双酚A对中国林蛙精子发生的影响

论文摘要

酚类物质作为工业原料，在世界范围内被广泛使用。环境中释放出来的酚类物质及其衍生物大多数为化学性质稳定、难降解、可以通过食物链富集，所以很容易进入生物体内，干扰正常的激素效应，对动物的生殖产生深刻而广泛的影响，双酚A就是其中的一种。本研究将选用两栖动物中国林蛙（Rana chensinesis）为研究对象，以E2作为阳性对照，在中国林蛙精子发生的不同时期进行水体染毒，用组织学观察和免疫组化方法，研究双酚A（BPA）对中国林蛙精子发生的影响及其规律。实验结果及结论如下：1．为研究双酚A（BPA）对中国林蛙排精和受精的影响，在中国林蛙的繁殖季节，将中国林蛙雄性成体分别暴露在5×10-7M、5×10-8M BPA，5×10-8M、5×10-10M E2的水体中；将雌性成体暴露在含5×10-7M、5×10-8M BPA水体中，共62天。观察统计雌性排卵、雄性排精情况及胚胎的孵化率。结果显示，BPA对雌性成体排卵没有影响。但在雄性成体，BPA和E2处理可影响林蛙的排精，经组织切片观察，精巢在排精期，大部分精子仍附着在生精小管的支持细胞上，未能排放。而在对照组，精巢内的大部分精子已经离开管壁进入管腔中。说明BPA能抑制中国林蛙雄性成体的精子排放，从而影响受精和胚胎孵化。2．为探讨BPA对中国林蛙精子发生的影响，在中国林蛙精子发生的不同时期，包括精子排放期、精原细胞增殖期、精母细胞成熟分裂期、精子形成期、成熟精子储存越冬期，将中国林蛙分别暴露在5×10-7M BPA、5×10-8M BPA，5×10-9M E2、5×10-10M E2的水体中，每期约60天。结果表明，在精子排放期和成熟精子储存越冬期，精巢间质区明显增厚；在精子排放期精子排出受到抑制；在精原细胞增殖期，精原细胞和支持细胞产生凋亡；在精母细胞成熟分裂期，精母细胞和支持细胞增殖被抑制；在精子形成期，精子形成和成熟被延缓。说明在中国林蛙精子发生中，BPA明显影响精子发生的进程；而且在精子发生的不同时期，BPA对精子发生的影响机制可能存在差异。3．用免疫组化方法检测中国林蛙精子发生过程中精巢中激素的分布及受体的表达。结果显示，正常林蛙精巢中T和AR的阳性反应在4月比较弱，在6月增强，在8月继续增强，在9月减弱，在12月明显减弱。精巢中E2和ER阳性反应在4月较强，在6月减弱，在8月也减弱，在9月明显增强，在12月又明显减弱。精巢中ARO的阳性反应，在4月较强，在6月减弱，在8月又增强，在9月减弱，在12月明显增强。可见精巢中T与AR、E2与ER的变化一致，ARO的变化与E2、ER基本一致；E2与T的变化规律是一种负相关的。表明本实验所用免疫组化方法检测的T、AR、E2、ER以及ARO变化从理论上是合理的。中国林蛙精子发生进程与T、AR、E2、ER含量以及ARO的表达变化规律密切关系，这种关系符合脊椎动物精子发生过程激素调控的基本规律。4．用免疫组化方法检测BPA对中国林蛙精子发生过程中精巢中激素及受体的影响。结果：（1）各处理组精巢中T阳性反应在4月、8月和12月均增强，在6月和9月减弱。AR在4月和6月减弱，在8月份增强，在9月和12月各处理组中无明显变化。（2）各处理组精巢中E2阳性反应在4月、6月、8月和12月均增强，在9月减弱。ER在4月、9月和12月各处理组中均减弱，在6月和8月各处理组均轻微增强。（3）各处理组精巢中ARO的阳性反应在4月、6月、8月和12月均减弱，在9月各处理组均增强。这些结果说明，在中国林蛙精子过程中，BPA能明显影响精巢中的激素含量及受体表达水平，但在精子发生不同时期的影响是有差异的，T与AR之间、E2、ER与ARO之间的变化也不完全一致。说明在成体林蛙，BPA可能不是通过影响ARO的活性来影响E2水平的。提示BPA通过林蛙生活的水体可以干扰生殖内分泌活动，但林蛙精巢发育的不同时期、不同的个体对BPA的敏感程度存在差异，致使BPA对生殖内分泌活动影响的规律性不强。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一部分 酚类环境污染对精子发生的雌激素效应研究进展
• 一、污染物的种类及来源
• 二、酚类对动物的雌激素效应及其作用机制
• 1 酚类对精巢中支持细胞和间质细胞结构和功能的影响
• 2 酚类对生精细胞的影响
• 3 酚类对性激素的合成及作用途径的影响
• 三、酚类对两栖动物精子发生的影响
• 1. 两栖动物的精子发生
• 1.1 两栖动物精子发生的特点
• 1.2 精子发生的内分泌调节
• 2. 环境污染对两栖动物的影响
• 第二部分 双酚A对中国林蛙排精和受精的影响
• 一、导言
• 二、材料和方法
• 三、结果
• 1. 排卵数量及其孵化率
• 2处理后林蛙精巢的组织学观察'>2. BPA和E₂处理后林蛙精巢的组织学观察
• 四、讨论
• 1. BPA对中国林蛙的排卵及受精的影响
• 2. BPA对中国林蛙精子排出的影响
• 第三部分 双酚A对中国林蛙精子发生影响的组织学观察
• 一、导言
• 二、材料和方法
• 三、结果
• 1. 精子排放期
• 2. 精原细胞增殖期
• 3. 精母细胞成熟分裂期
• 4. 精子形成期
• 5. 成熟精子储存期
• 四、讨论
• 第四部分 双酚A对中国林蛙精巢中激素及其受体表达的影响
• 一、导言
• 二、材料和方法
• 三、结果
• 1. 中国林蛙精巢中激素及受体的分布
• 2 双酚A对精巢中激素含量及受体表达的影响
• 2.1 对精巢中T分布的影响
• 2.2 BPA对精巢中AR表达的影响
• 2分布的影响'>2.3 BPA对精巢中E₂分布的影响
• 2.4 BPA对精巢中ER表达水平的影响
• 2.5 BPA对精巢中ARO表达水平的影响
• 四、讨论
• 1. 两栖动物精巢中性激素及受体的分布
• 2. BPA对精巢中T及AR的影响
• 2及ER的影响'>3. BPA对精巢中的E₂及ER的影响
• 4. BA对精巢中ARO活性的影响
• 总结
• 参考文献
• 图版
• 图版说明
• 致谢
• 攻读学位期间研究成果