β1肾上腺素能受体基因导向美托洛尔降压疗效差异的相关因素分析

论文摘要

目的研究β1-肾上腺素能受体（β1-AR）基因导向美托洛尔降压疗效差异的相关个体获得性因素;探讨DNA甲基化修饰对β1-AR基因表达调控的影响,了解基因导向美托洛尔降压疗效差异的表观遗传学分子机制,丰富和完善高血压病个体化治疗的基础和临床研究资料。方法应用聚合酶链式反应-限制性片断长度多态性（PCR-RFLP）和聚合酶链式反应（PCR）方法检测CYP2D6*10位点和β1-AR389位点的基因多态性。筛选CYP2D6*10位基因型为*10*10的原发性高血压患者107例,按照β1-AR389位基因型分为Arg/Arg组和Gly/Arg+Gly/Gly组;收集性别、年龄、身高、体重、血糖、血脂、吸烟史等相关资料;并给予美托洛尔100mg/d,一天两次口服降压治疗,随访8周,观察比较两组血压、心率及不良反应等指标。从前一部分研究中,进一步筛选CYP2D6*10位基因型为*10*10且β1-AR389位基因型为Arg/Arg的63例原发性高血压患者作为本研究的入选病例,利用已经收集的相关资料和最终的美托洛尔降压疗效判断结果,行单因素和多因素综合分析患者的年龄、基线血压、体质指数（BMI）、高脂血症、吸烟等相关个体获得性因素和美托洛尔降压疗效差异的关系。此外,对H9c2大鼠心肌细胞常规培养后随机分为5-氮脱氧胞（5-aza-dC）实验组和DMSO对照组。实验组细胞按照5-aza-dC干预浓度的不同分别设计0.5μmol/L、2.0μmol/L、5.0μmol/L、10.0μmol/L四个工作浓度组,实验组及对照组细胞均干预72h。比较H9c2心肌细胞数量及形态的变化,并应用AO/EB染色法观察和比较细胞凋亡情况;亚硫酸钠测序、甲基化特异性PCR（MSP）检测H9c2心肌细胞β1-AR基因启动子区甲基化修饰状态;荧光定量RT-PCR分析该基因mRNA表达的差异。结果1.研究β1-AR基因导向美托洛尔降压疗效的差异:107例CYP2D6*10*10的原发性高血压患者,按照β1-AR389位点基因多态性分为Arg/Arg组63例、Gly/Arg+Gly/Gly组44例,两组美托洛尔降压有效率分别为65.5%、40.9%,差异有统计学意义（P＜0.05）;进一步分析发现,Arg/Arg组中仍有23例患者降压治疗无效,其无效率高达35.5%。2.分析β1-AR基因导向美托洛尔降压疗效差异的相关获得性因素:单因素分析结果提示,基线收缩压和BMI显著影响美托洛尔降压疗效（P＜0.05）。而年龄、基线舒张压、高脂血症、吸烟和美托洛尔降压有效率之间未见显著关系（P＞0.05）。多因素综合分析结果提示,基线收缩压是影响美托洛尔降压疗效的重要原因。3.探讨β1-AR基因导向美托洛尔降压疗效差异的表观遗传学分子机制:H9c2大鼠心肌细胞β1-AR基因启动子区存在甲基化修饰。5.0μmol/L 5-aza-dC对心肌细胞干预后,β1-AR基因启动子区甲基化水平下调,该基因mRNA表达水平随之明显升高,和对照组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论1.β1-AR Gly389Arg基因多态性影响美托洛尔降压疗效,Arg/Arg基因型原发性高血压患者降压疗效显著优于Gly/Arg和Gly/Gly基因型患者。然而,即使是Arg/Arg的敏感型高血压患者中美托洛尔降压疗效仍然存在显著的个体差异,基线收缩压和BMI是β1-AR基因导向美托洛降压疗效差异的重要原因,较高的基线收缩压和正常BMI的患者预示着更好的药物疗效。2.β1-AR基因启动子区存在甲基化修饰,该区域DNA甲基化水平下调促进β1-AR基因mRNA的表达。因此推测,DNA甲基化可能通过调控受体基因表达,成为β1-AR基因导向美托洛尔降压疗效差异的重要表观遗传学分子机制。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩略词表
• 前言
• 第一章 β1-AR基因导向美托洛尔降压疗效差异的研究
• 材料与方法
• 结果
• 第二章 β1-AR基因导向美托洛尔降压疗效差异的相关获得性因素的分析
• 材料与方法
• 结果
• 第三章 β1-AR基因导向美托洛尔降压疗效差异表观遗传学分子机制的探讨
• 材料与方法
• 结果
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 文献综述
• 附录
• 致谢
• 攻读学位期间主要的研究成果