论文摘要
目的：用悬浮克隆培养技术，在体外从新生大鼠的海马分离神经干细胞，并进行扩增传代培养，观察其增殖、迁移及多潜能分化特性，为下一步试验打下基础。 方法：解剖显微镜下取新生大鼠海马组织，0.125％的胰蛋白酶溶液消化后，分别以4×104/ml、4×105/ml和4×106/ml三种密度接种于25cm2培养瓶中悬浮培养，2-3天半量换液，6-7天后传代。将培养的神经干细胞球接种在放入24孔内板涂有多聚赖氨酸的玻璃盖片上，在不同培养基条件下观察其贴壁后的迁移、增殖和分化。应用抗Nestin、抗MAP2、抗MBP和抗GFAP进行细胞化学染色鉴定。 结果：自新生大鼠海马组织培养获得的细胞培养后形成的细胞球为Nestin阳性，能够耐受多次体外传代。104/ml这一接种密度由于细胞量少，发生细胞重聚的可能性降低，有利于干细胞的克隆形成。这些细胞接种后贴壁培养可以分化为MAP2阳性的神经元、MBP阳性少突胶质细胞及GFAP阳性星形胶质细胞。神经干细胞球贴壁后在含有bFGF及IGF-1培养基内分化，细胞迁移的距离明显较不完全及含小牛血清的培养基条件下远。 结论：1、自新生大鼠海马组织培养获得的细胞球能够自我复制，具有多种分化潜能，即可以分化为神经元、少突胶质细胞及星形细胞，并能够耐受多次体外传代，具有神经干细胞的特点。 2、bFGF及IGF-1可以促进贴壁培养的神经干细胞的迁移。 3、本实验获得的神经干细胞细胞可以体外大量增殖，能够满足我们下一步试验的需要。
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