亚胺培南对生物膜铜绿假单胞菌AmpC调控蛋白及外膜蛋白OprD表达的影响

论文摘要

目的研究铜绿假单胞菌在浮游态、生物膜态和亚胺培南诱导下AmpC酶调控蛋白AmpD、AmpE和AmpG及外膜蛋白OprD基因表达情况,探讨铜绿假单胞菌耐药机制。方法应用铜绿假单胞菌PAO1在Eppendorf管内建立生物膜模型,通过快速结晶紫染色证实生物膜的形成。应用实时荧光定量PCR法分别检测浮游菌(A组)、生物膜菌(B组)、亚胺培南诱导浮游菌(C组)和亚胺培南诱导生物膜菌(D组)AmpC酶调控蛋白AmpD、AmpE和AmpG及外膜蛋白OprD基因表达情况。结果A组与B组AmpD、AmpE和AmpG蛋白的基因表达量均较低,两组差别均无统计学意义(P>0.05)；C组AmpD、AmpE和AmpG蛋白的基因表达量高于A组,分别是A组的12.33、7.89和11.75倍,两组差别均有高度统计学意义(P<0.01)；D组AmpD、AmpE和AmpG蛋白的基因表达量高于B组,分别是B组的30.73、31.79和11.25倍,两组差别均有高度统计学意义(P<0.01)；D组AmpD、AmpE蛋白的基因表达量高于C组,分别是C组的2.47和4.08倍,两组差别均有统计学意义(P<0.05),两组AmpG蛋白的基因表达量差别无统计学意义(P>0.05)。外膜蛋白OprD的基因表达量A组与B组差别无统计学意义(P>0.05),C组与A组、D组与B组差别亦均无统计学意义(P>0.05)。结论铜绿假单胞菌PAO1 AmpC酶调控基因同其合成基因一样并非白发启动,亚胺培南可诱导AmpC酶调控基因表达增加,且生物膜菌较浮游菌更易被诱导产生AmpD和AmpE蛋白。未发现亚胺培南诱导PAO1外膜蛋白OprD表达减少。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 第一章 材料和方法
• 1.1 实验材料
• 1.1.1 菌株来源
• 1.1.2 抗菌药物
• 1.1.3 主要试剂
• 1.1.4 主要仪器
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 生物膜模型的建立
• 1.2.2 最低抑菌浓度（MIC）的测定
• 1.2.3 细菌培养
• 1.2.4 实时荧光定量PCR
• 1.2.4.1 RNA提取
• 1.2.4.2 检测RNA完整性
• 1.2.4.3 cDNA合成
• 1.2.4.4 实时荧光定量PCR
• 1.2.4.5 数据分析
• 1.3 统计学处理
• 第二章 结果
• 2.1 生物膜模型的建立
• 2.2 生物膜菌生长曲线
• 2.3 MIC的测定
• 2.4 总RNA的提取
• 2.5 实时荧光定量PCR结果
• 2.5.1 扩增曲线及熔解曲线
• 2.5.2 实时荧光定量PCR结果
• 2.5.2.1 亚胺培南诱导前后PA01浮游菌和生物膜菌ampD基因表达
• 2.5.2.2 亚胺培南诱导前后PA01浮游菌和生物膜菌ampE基因表达
• 2.5.2.3 亚胺培南诱导前后PA01浮游菌和生物膜菌ampG基因表达
• 2.5.2.4 亚胺培南诱导前后PA01浮游菌和生物膜菌oprD基因表达
• 第三章 讨论
• 第四章 结论
• 参考文献
• 综述
• 综述参考文献
• 攻读学位期间的研究成果
• 致谢