hSSTR2基因转染肺癌细胞的肿瘤核素显像与杀伤研究

论文摘要

目的：将人的生长抑素2亚型受体（hSSTR2）基因转染入不表达或低表达该受体的肿瘤细胞，研究生长抑素类似物125I－伐普肽（RC-160）与其结合的规律，以及131I－RC-160在体外对转染后肿瘤细胞的杀伤作用，并进一步利用动物模型完成在体条件下由该受体介导的肿瘤受体显像显像与杀伤作用研究。方法：1.应用反转录PCR（RT-PCR）方法获得hSSTR2基因并构建真核表达载体；2.将hSSTR2基因转染至hSSTR2表达阴性的肺腺癌A549细胞系，RT-PCR及流式细胞术检测受体的表达，并筛选hSSTR2的高表达的细胞株；3.采用放射性配基结合分析法，以125I－RC-160为放射性配基，对高表达hSSTR2基因的细胞株进行该受体体外结合特性研究；4.不同浓度Na131I、131I-RC-160、RC-160对转染基因后的肿瘤细胞作用24、48、72和96h后，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测体外的杀伤效应；5.建立裸鼠移植瘤模型，以99mTc-RC-160为受体显像剂，探索该受体介导的肿瘤显像方法；6.建立裸鼠移植瘤模型，比较131I-RC-160、Na131I、RC-160对在体肿瘤模型的杀伤效应。结果：获得了hSSTR2基因，经基因测序全部正确；采用流式细胞和RT-PCR方法检测高表达hSSTR2受体的细胞株，作为进一步实验的基础；经体外结合实验研究，得到受体结合特性参数：平衡解离常数（KD值）为5.65±1.33×10-10mol/L，半数抑制浓度(IC50)为1.88±0.57×10-9mol/L，最大结合容量(Bmax)为2.01×104位点／细胞。131I－RC-160对A549-hSSTR2细胞的体外杀伤作用，明显强于对A549-pcDNA3细胞的作用，杀伤效果与剂量、时间呈一定的正相关关系，作用96h后，剂量浓度为3.7MBq/ml的治疗组(131I－RC-160)对A549-hSSTR2细胞抑制率可达到78.8±5.9%。131I-RC-160对在体A549-hSSTR2移植瘤同样表现出明显的抑制效应，抑瘤率可达75.1±4.2%。在体裸鼠肿瘤模型进行显像研究，将99mTc－RC-160作为显像剂经静脉注射后0.5－1h，肿瘤清晰显影，之后显影逐渐减淡，但注射后24h肿瘤部位仍见显影。结论：hSSTR2基因转染入不表达或低表达该受体的肿瘤细胞，然后进行肿瘤受体显像的方法是可行的。注射显像剂99mTc-RC-160后0.5－1h是最佳显像时间；131I－RC-160对A549-hSSTR2细胞的体外杀伤作用，明显强于对A549-pcDNA3细胞的作用，说明131I－RC-160对转染hSSTR2后的肿瘤的杀伤存在生物抑制和核素内照射协同杀伤的现象。SSTR2低表达或不表达的肿瘤转染了hSSTR2基因后，所表达的hSSTR2能够与生长抑素类似物结合，通过该受体-配基的结合介导放射性核素对细胞进行靶向杀伤，使这类阴性肿瘤的治疗效果得到很大提高，本研究提供了核素靶向性内照射通过外源性受体基因的介导用于肿瘤治疗的实验依据。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 文献回顾
• 第一部分 hSSTR2 基因的克隆及高表达 hSSTR2的A549细胞系的建立
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 第二部分 放射性碘标记RC - 160对A549 - hSSTR2细胞的体外受体结合分析及体外杀伤研究
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 第三部分 放射性核素标记 RC-160 在动物体内生物学分布及 A549-SSTR细胞的裸鼠移植瘤模型显像
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 131I－RC-160对hSSTR2基因转染后A549细胞移植瘤的肿瘤杀伤作用研究'>第四部分¹³¹I－RC-160对hSSTR2基因转染后A549细胞移植瘤的肿瘤杀伤作用研究
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 小结
• 参考文献
• 个人简历和研究成果
• 致谢