论文摘要
目的:塞来昔布（Celecoxib）能有效增强放射线对肿瘤的作用,但其作用及机制尚不清楚。本实验观察塞来昔布对人乳腺癌MDA-MB-231细胞株的放射增敏的作用并探讨其可能的机制。方法:以人乳腺癌MDA-MB-231细胞株为实验对象,通过体外细胞培养,噻唑蓝（MTT）比色法检测不同浓度（10μmol/L、20μmol/L、30μmol/L、40μmol/L、50μmol/L、60μmol/L）的塞来昔布对MDA-MB-231细胞毒性,计算IC20、IC50,并选择IC20药物浓度作为后续实验浓度;流式细胞仪（flow cytometry, FCM）检测不同浓度（0μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、60μmol/L）的塞来昔布对MDA-MB-231细胞周期的影响;塞来昔布对MDA-MB-231细胞的放射增敏作用,实验分4组:对照组:不做任何干预;药物组:塞来昔布处理;照射组:X线照射;实验组:塞来昔布联合X线照射。FCM检测实验各组肿瘤细胞凋亡率;克隆形成实验检测塞来昔布对MDA-MB-231细胞放射增敏作用,并计算存活分数,单击多靶模型拟合细胞存活曲线;Western blot法检测各组Akt、pAkt、COX-2蛋白表达,以此探讨塞来昔布对MDA-MB-231细胞放射增敏的作用机制。结果:1.MTT结果显示不同浓度塞来昔布作用MDA-MB-231细胞24 h后,有明显的抑制作用,并且呈剂量依赖性,药物IC50、IC20分别约为（50.14士2.42）μmol/L、（20.21士1.34）μmol/L。2. FMC结果显示细胞周期明显变化,且成剂量依赖性,G1/G0期比例增多,差异有显著性（P<0.05）,S期比例显著降低（P<0.05）,G2/M期比例无差异（P>0.05）。3. FMC仪检测肿瘤细胞放射诱导凋亡变化,药物组和照射组都可诱导MDA-MB-231细胞凋亡,实验组凋亡率[（31.20±1.27）%]显著高于照射组[（17.99±1.01）%]（P<0.05）;4.克隆形成实验结果显示,与照射组相比较,实验组表示放射敏感性参数的准域剂量（Dq）、平均致死剂量（DO）、2 Gy照射的存活分数（SF2）值均显著降低（0.437 vs 1.175,1.874 vs 2.394,0.52 vs 0.79）,放射增敏比（SERDo）为1.277。5. Western blot法检测结果显示,各组Akt蛋白表达无明显差异,但塞来昔布能抑制pAkt表达,而放射线上调pAkt表达,二者联合对pAkt表达有明显抑制作（P<0.05）。塞来昔布抑制COX-2表达,放射线上调COX-2表达,二者联合对COX-2有明显抑制作用（P<0.05）。结论:1.塞来昔布对人乳腺癌MDA-MB-231细胞有明显的放射增敏作用。2.塞来昔布能增强人乳腺癌放射敏感性的机制可能是通过阻断PI3K/Akt信号通路的活化从而提高乳腺癌放疗敏感性。