流式微球技术检测血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa抗体的方法建立及临床应用

论文摘要

研究背景特发性血小板减少性紫癜（idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP）是一种由于患者体内产生针对血小板和巨核细胞膜表面糖蛋白的自身抗体,导致血小板免疫性破坏过多、外周血中血小板减少的出血性疾病。ITP的诊断国内外仍依赖临床排除性诊断,缺乏特异性。七十年代以来血小板相关免疫球蛋白（platelet associated immunoglobulin,PAIg）检测在ITP的特异诊断中曾被寄予厚望,但多年临床验证已证明PAIg特异性差,无助于ITP诊断,早在上世纪九十年代就被国际同行所摈弃。ITP患者血小板糖蛋白（glucoprotein,GP）特异性自身抗体通常针对Ⅱb/Ⅲa或Ⅰb/Ⅸ,针对糖蛋白特异性自身抗体的检测方法如单克隆抗体俘获血小板抗原技术（monoclonal antibody immobilization of plateletantigen technique,MAIPA）、放免微球技术（Radioactive immunobead assay,RIA）有很高的特异性（78%-93%）,对ITP的确诊有重要意义,但是其敏感性偏低（49%-66%）,且存在一些方法学上的限制难以在临床上广泛开展。流式微球技术（cytometric bead array,CBA）是基于流式细胞仪发展起来的新技术,它以聚苯乙烯微球为反应界面,利用特异性单克隆抗体包被后即可俘获一些小分子物质,通过检测微球的“放大”作用对一些小分子物质进行检测。近年来,CBA正越来越多的应用于血清、血浆、培养细胞上清、眼泪或房水等各种液相中可溶性蛋白及细胞因子的检测。目的建立流式微球技术检测血小板膜表面糖蛋白特异性自身抗体的方法,比较该方法和改良间接MAIPA在ITP与非免疫性血小板减少性紫癜鉴别珍断中的价值。材料和方法1、病例及正常对照选择:ITP患者56例,非免疫性血小板减少患者35例,共91例。（两组患者采血时血小板计数均低于100×109/L,且近三月内未接受输血）。正常志愿者30例,均无输血或妊娠史,性别、年龄与病人组相匹配。2、方法:应用抗人血小板GPⅡb/Ⅲa单抗（CD41a）包被微球,分离血样中的血小板,将血小板裂解后与包被过的微球孵育,之后加入PE标记的羊抗人IgG多克隆抗体,流式细胞仪分析。同时应用改良间接MAIPA检测血浆中的血小板GPⅡb/Ⅲa自身抗体。比较两种检测方法的敏感性及特异性。结果将标本的平均荧光强度值（mean fluorescence intensity,MFI）与正常对照（三个不同正常人的血样）MFI的均值比较,计算比率。该比率均值及上下限在ITP组为3.36（0.84-22.94）,非免疫性血小板减少组1.16（0.67-5.59）,正常对照组1.08（0.72-1.76）。非参数检验得ITP组荧光强度比率与非免疫性血小板减少组及正常对照组存在显著差异（P＜0.01）。若将正常对照组上限作为界值,比率大于1.76定为阳性,则流式微球技术诊断ITP的敏感性为71.43%,特异性为94.28%,阳性预测值为95.24%,其敏感性高于改良间接MAIPA（51.79%）（χ2=4.57,P＜0.05）。由ROC曲线得流式微球法区分ITP与正常人的鉴别效度为0.916。结论流式微球技术检测血小板膜表面糖蛋白特异性自身抗体,耗时短、重复性好,敏感性高于改良间接MAIPA,对提高ITP的实验诊断水平及指导临床治疗有一定的价值。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 符号说明
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士期间发表的论文
• 学位论文评阅及答辩情况表